安徽省油菜菌核病菌致病性、多菌灵抗药性及遗传多样性研究

摘要

核盘菌Sclerotinia sclerotiorum(Lib)de Bary属于子囊菌门、盘菌纲、柔膜菌目、核盘菌属真菌,其寄主范围和地理分布十分广泛,所引致的油菜菌核病是一种相当严重的世界性植物真菌病害。
　　本学位论文对安徽省不同地区的油菜菌核病菌的致病性、对多菌灵抗药性和遗传多样性等进行了研究,并探讨了致病性分化及抗药性产生的机制,以期为油菜菌核病菌的致病机理研究、抗药性治理和所致病害的综合治理提供理论基础。主要研究结果如下:
　　1.安徽省油菜菌核病菌致病性分化研究
　　从安徽桐城、旌德、宣州、望江、宁国、寿县、合肥、无为、庐江等市、县发病油菜上分离获得85个油菜菌核病菌菌株,采用离体叶片接种法测定了油菜菌核病菌不同菌株对4个不同品种油菜的致病力,同时测定部分供试菌株的产草酸能力和菌丝生长速率,分析菌核病菌菌株的致病性与油菜品种抗病性间的相关性。结果表明,绝大多数供试菌株接种油菜叶片后均可引起发病,同一菌株在不同品种的油菜上致病力有所不同(菌株SX11除外,其对4个不同品种的致病力均为0);不同菌株的致病力存在极显著差异,4个油菜品种之间存在差异显著性。菌株的致病力与产草酸能力有一定的相关性(r=0.8619,R2=0.7429),与菌丝生长速率无相关性,与菌株的地理来源也无关。
　　2.安徽省油菜菌核病菌对多菌灵抗药性监测及遗传机制研究
　　从安徽省合肥、桐城、旌德、宁国、庐江、无为、芜湖、寿县、六安、南陵、宣州、繁昌和望江等13个市县的油菜病茎上分离得到74个油菜菌核病菌菌株,对其进行了多菌灵抗药性测定。结果表明,有22株对多菌灵表现出不同程度的抗药性,除庐江、南陵、宣州、繁昌和望江外,上述各地均有抗药性菌株分布,但抗药性菌株所占的比例不一,以六安系列监测到的抗药性个体比例所占比例最大(100.00％),桐城最小(14.29%);但监测到 SX4对多菌灵的抗药性最强,高达418.8048mg/L,SX2和NGA5也达到高抗水平,EC50分别为214.9593 mg/L和88.5202mg/L。结果提示,安徽省部分地区油菜菌核病菌已经对多菌灵产生了抗药性。本研究通过上下游引物扩增获得与核盘菌相关的β-微管蛋白基因,该基因全长1344bp(不包含内含子序列),相应编码447个氨基酸。高抗菌株β-微管蛋白基因198位氨基酸由谷氨酸(Glu)突变为丙氨酸(Ala),突变位点和突变类型与其他抗多菌灵病菌一致;低抗菌株的β-微管蛋白基因与敏感菌株一致,没有发生突变。本研究对油菜菌核病菌的抗药性与致病性相互关系进行了研究,发现其抗药性与致病性没有相关性。
　　3安徽省不同地区油菜菌核病菌遗传多样性的ISSR分析
　　本研究采用ISSR标记技术对47个安徽省油菜菌核病菌菌株进行DNA指纹分析。从筛选出的12个引物对这47个油菜菌核病菌菌株进行ISSR-PCR扩增,共扩出136个ISSR条带,其中多态性条带为125个,占92.7%,表明安徽省油菜菌核病菌中存在较丰富的遗传多样性。菌株间的遗传相似系数为0.56~0.91,Nei’s基因多样性指数(h)范围为0.099~0.378,Shannon's信息指数(Is)范围为0.172~0.562。UPGMA聚类分析发现,在阈值为0.81时,菌株被分为7个类群。聚类组的划分与其地理来源无相关性。

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插图和附表清单

第一章 绪 论

1作物菌核病的研究进展

2作物菌核病的致病机制

3作物菌核病的防治

4苯并咪唑类杀菌剂抗药性的研究进展

5植物病原真菌群体遗传学研究进展

6 本研究的目的意义

第二章 安徽省油菜菌核病菌致病性分化研究

1 材料与方法

2 结果与分析

3小结与讨论

第三章 安徽省油菜菌核病菌对多菌灵抗药性的遗传机制研究

3 小结与讨论

第四章 安徽省不同地区油菜菌核病菌遗传多样性的ISSR分析

2 结果与讨论

4 讨论

全文总结

一、本文结论

二、本文的主要创新点

三、今后研究设想

参考文献

致谢

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