黄芪及其复合剂抗血吸虫作用的实验研究

摘要

目前，用于抗血吸虫的主要药物仍然是吡喹酮（PZQ）和青篙素类，前者主要杀成虫，后者只对感染后第7d-21d童虫有效，尚缺抗感染宿主后7d以内虫体的药物。我们课题组在研究中发现作为临床使用了30余年的吡喹酮，其杀虫效果较10年前有明显减低。因此，开展抗血吸虫新药的研究以及寻找新的治疗途径已成为当前血防研究中重要课题。早已研究证明，中药黄芪是一种免疫调节剂，并被广泛应用于临床。近年有研究发现：黄芪与吡喹酮联用可提高杀虫效果；黄芪具有一定抗血吸虫性肝纤维化作用；黄芪可增强抗血吸虫疫苗效果。然而，黄芪这些作用是通过直接影响血吸虫的生长发育，还是通过调节宿主免疫来发挥作用的则是一个值得探讨的问题。此外，较早的研究表明，南瓜子和槟榔具有抗血吸虫早期童虫的作用，但是否具有实用价值则需通过实验来加以证实。本研究设想，在了解黄芪抗血吸虫作用的基础上，将黄芪、南瓜子和槟榔等中药组成复合剂来观察其抗血吸虫效果，可望为防治实践提供实用的辅助方法。 目的：了解黄芪对血吸虫生长发育及血吸虫感染小鼠免疫应答的影响；比较黄芪、南瓜子仁和槟榔单一与联用抗血吸虫效果差异。 方法：采用清洁级昆明小鼠，设计两个动物试验。实验一设[感染对照、黄芪低量（0.25g/鼠/d）、黄芪高量（0.5g/鼠/d）、黄芪低量+吡喹酮（150mg/kg.d）、单用吡喹酮（150mg/kg.d）以及正常小鼠对照]6个组，了解自然连续饮服黄芪对感染小鼠体内血吸虫生长发育的影响。与此同时，采用免疫学和生物化学的方法对实验小鼠血清中抗卵抗体和抗成虫抗体、IL-6和IL-10以及羟脯氨酸水平进行检测，以阐述黄芪对血吸虫感染宿主免疫应答的影响。实验二设（感染对照、感染后1-10d用复合中药、感染后8-17d用复合中药、感染后第15-24d用复合中药、感染后第28-37d用复合中药、感染后第1-10d单用南瓜子、感染后第1-10d用南瓜子+槟榔、感染后第36d用150mg/kg.d的PZQ和感染后第36d用300mg/kg.d的PZQ）9个组，观察以黄芪为主药所组成的中药复合剂对感染小鼠体内不同发育期虫体作用的差异。 结果：1.实验一结果显示：与感染对照组比，在抗虫效果方面，经50d定量饮服单一黄芪，低量黄芪组和高量黄芪组的减虫率分别为29.2％和30.3％，雄虫体长度分别减少了10.49％和10.57％，雌虫体长度分别减少了8.40％和15.33％；肝卵减少率分别为31.1％和36.0％，均具统计学意义（P<0.05）：在对感染宿主免疫应答方面，与感染对照组比，饮用黄芪两组鼠的血清中抗SEA抗体水平显著降低（P<0.05）、促炎细胞因子（IL-6）水平显著降低（P<0.01）、抗炎细胞因子（IL-10）水平显著增高（P<0.05）及羟脯氨酸含量降低。2.实验二结果显示，其抗虫效果，与平行的感染对照组比，复合中药用于血吸虫感染后1-10d组、8-17d组和15-24d组的减虫率，分别为36.21％、26.74％和39.04％，肝卵减少率分别为58.6％、32.2％和47.7％，经统计学处理其差异均具显著性（P<0.05），肝表面虫卵结节密度值可见明显减小，但在感染后第28-37d用复合中药组、感染后第1-10d单用南瓜子组和南瓜子+槟榔合用组与平行的感染对照组比，减虫率和肝卵减少率均无统计学差异；3.在两批动物实验中，采用吡喹酮治疗感染后第36d小鼠的效果均不理想（减虫率150mg/kg.d的为35.8％-37.83％和300mg/kg.d的为59.81％），但服用黄芪后的小鼠再以150mg/kg.d剂量的吡喹酮进行治疗后其杀虫效果则有提高；4.采用黄芪注射液对血吸虫脱尾童虫进行体外杀伤实验的结果显示，24小时杀伤校正死亡率为24.1％，48小时为22.0％。 结论：黄芪对血吸虫童虫具有较好的抗虫作用，对血吸虫感染宿主免疫应答的影响表现在血清中抗卵抗体应答水平、IL-6水平及羟脯氨酸含量降低和IL-10表达水平升高；南瓜子和槟榔对血吸虫无明显杀伤作用。

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论文说明：缩略词

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前言

第一章 黄芪抗血吸虫作用的初步研究

1材料与方法

1.1寄生虫和实验动物来源

1.2主要仪器

1.3主要试剂及器材

1.4动物实验设计

1.5抗虫效果的评价指标与方法

1.6鼠血清中抗体的检测

1.7鼠血清中IL-6水平测定

1.8鼠血清中IL-10水平测定

1.9鼠血清中羟脯氨酸水平测定

1.10体外杀早期童虫试验

1.11统计学分析

2结果

2.1虫荷数与虫体发育程度

2.2肝卵荷与肝表面虫卵结节密度值

2.3血清中抗成虫抗体和抗虫卵抗体水平

2.4血清中白介素-6和白介素-10的水平

2.5血清羟脯氨酸的浓度

2.6黄芪体外抗早期童虫作用

3讨论

第二章 黄芪复合剂抗血吸虫效果的实验观察

1材料与方法

1.1寄生虫和实验动物来源

1.2主要仪器

1.3主要试剂

1.4实验动物设计

1.5抗虫作用效果评价指标与方法

1.6统计学分析

2结果

2.1虫荷与减虫率

2.2肝卵减少率

2.3肝表面虫卵结节密度值

3讨论

结论

参考文献

综述 黄芪在血吸虫病防治中的应用研究进展

致谢

攻读学位期间主要研究成果