Dvl 家族在斑马鱼侧线毛细胞再生调控中的作用

目录

第 1 章绪 论

1.1 毛细胞的功能与损伤

1.2 斑马鱼侧线系统

1.2.1 斑马鱼研究侧线再生的优势

1.2.2 斑马鱼侧线系统的结构与发生

1.2.3 斑马鱼后侧线毛细胞的前体细胞来源

1.2.4 斑马鱼后侧线毛细胞的再生模型的建立

1.3 研究内容及意义

第 2 章实验材料与方法

2.1 实验动物品系与饲养

2.2 斑马鱼后侧线毛细胞损伤的处理方法

2.3 斑马鱼后侧线毛细胞标记方法

2.3.1 斑马鱼后侧线毛细胞抗体染色实验

2.3.2 YO-PRO-1 小分子染色剂染色

2.3.3 细胞核的 DAPI 染色

2.4 基因定量表达检测

2.4.1 总 RNA 的提取

2.4.2 RNA 反转录成 cDNA

2.4.3 聚合酶链式反应

2.4.4 DNA 的纯化

2.4.5 荧光定量 PCR

2.5 体外转录

2.5.1 mRNA 的体外转录

2.5.2 RNA 的体外转录

2.5.3 RNA 的纯化

2.6 基因原位表达检测

2.6.1 探针合成

2.6.2 斑马鱼整体胚胎原位杂交方法

2.7 染色质免疫共沉淀

2.7.1 Western-Blot

2.7.2 ChIP-PCR

2.8 显微注射

第 3 章 dvl3a 参与调控斑马鱼侧线毛细胞的再生

3.1 引言

3.2 dvl3a 表达降低斑马鱼侧线毛细胞再生异常

3.3 dvl3a 可以促进 β-catenin 在胞质中的积累

3.4 本章小结

第 4 章 Sim1b 调控 dvl3a 的表达

4.1 引言

4.2 Sim1b 过表达质粒的构建

4.3 Sim1b 直接调控 dvl3a 的表达

4.4 本章小结

第 5 章 Sim1b 负调 dvl2 与 dixdc1b 的表达

5.1 引言

5.2 敲低 dvl3a 可以增强 dvl2 和 dixdc1b 的表达

5.4 Sim1b 负向调控 dicdx1b 与 dvl2 的表达

5.5 本章小结

第 6 章过表达 dvl3a 转基因鱼系的建立

6.1 引言

6.2 转基因鱼的建立

6.3 本章小结

结 论

参考文献

声明

致谢