河北省太行山区野生高等真菌资源调查及四种子实体抗氧化活性研究

摘要

本研究调查了河北省太行山地区大型野生真菌的种类及生态分布特点。随后，以大量分布的四种野生真菌子实体为材料，利用不同有机溶剂提取制备了其活性物质，并采用水提醇沉法制备了多糖组分。分别测定了各提取物的体外抗氧化活性。对其中体外抗氧化活性较强的组分，进一步分析了其体内抗氧化活性。具体结果如下：　　 1.太行山地区野生高等真菌主要出现在夏秋多雨季节（每年7-10月），三年共调查、采集到野生高等真菌145种。初步鉴定隶属2个亚门，即担子菌亚门3纲 7目26科70属 137种，子囊菌亚门 2纲 3目5科7属8种。其中食用菌55种，药用菌38种，毒菌13种，外生菌根菌6种，腐生菌47种。　　 2.以黄乳牛肝菌、晶粒鬼伞、毛云芝和绒边乳菇子实体为材料，采用不同极性的有机溶剂分别萃取这四种子实体中的活性物质，得每一材料的石油醚相、乙酸乙酯相和乙醇相；采用热水浸提、醇沉工艺制备了四种材料的多糖相。　　 (1) 对四种子实体三个有机相的抗氧化活性成分总酚、粗三萜和黄酮的含量进行了测定，结果表明：四种子实体的有机相均含有不同量的总酚、粗三萜，黄乳牛肝菌石油醚相、乙酸乙酯相、乙醇相的总酚含量分别是4.62％、6.4％和4.8％，明显高于其它子实体有机相提取物。四种子实体石油醚相和乙酸乙酯相提取物的粗三萜含量均高于乙醇相，四种材料的石油醚相粗三萜含量在20.35％-23.68％之间，且差异不显著；乙酸乙酯相中黄乳牛肝菌和毛云芝提取物的粗三萜含量较高，分别是19.18％和24.8％；乙醇相中毛云芝提取物的粗三萜含量最高，是14.4％，其次为黄乳牛肝菌提取物，含量为8.59％。石油醚相、乙酸乙酯相和乙醇相提取物的总黄酮含量均以黄乳牛肝菌含量最高，分别是1.7％、4.92％和0.43％，但晶粒鬼伞石油醚相、乙醇相和毛云芝石油醚相提取物中均不含有黄酮成分。　　 (2) 采用清除DPPH自由基、抑制脂质过氧化、还原能力测定及金属离子螯合力四种方法，检测了所有提取物的体外抗氧化活性，结果表明：四种子实体的各提取物均具有不同程度的抗氧化活性。　　 在清除DPPH自由基的实验中，黄乳牛肝菌有机相提取物清除DPPH的IC50值分别是0.00015μg/mL、0.18 mg/mL和0.26 mg/mL，明显低于其它材料的有机相和多糖相；其次是毛云芝乙酸乙酯相和乙醇相，IC50值分别为1.45mg/mL和1.31 mg/mL，以及绒毛栓菌乙酸乙酯相和乙醇相的IC50值分别为1.60 mg/mL和1.27 mg/mL，晶粒鬼伞石油醚相IC50值最高为23.08 mg/mL。　　 在抑制脂质过氧化的实验中，各子实体有机相提取物的抑制率均高于多糖相。黄乳牛肝菌石油醚相、乙酸乙酯相和乙醇相提取物的IC50值较低，分别为0.04 mg/mL、0.08 mg/mL和0.14 mg/mL；绒毛栓菌有机相提取物的IC50值也较低，分别是0.14 mg/mL、0.13 mg/mL和0.31 mg/mL；晶粒鬼伞石油醚相、乙酸乙酯相也具较好的抑制作用，IC50值分别为0.31 mg/mL和0.14 mg/mL。　　 在金属离子螯合力实验中，各材料的乙醇相和多糖相表现出较好螯合作用。黄乳牛肝菌的乙醇相和多糖相的IC50值较低，分别是2.78 mg/mL和1.44 mg/mL；晶粒鬼伞的多糖相的IC50值最低，为0.88 mg/mL。　　 在还原能力的测定中，当提取物浓度为10 mg/ml时，黄乳牛肝菌乙酸乙酯相提取物表现出的还原能力最高，吸光值为0.479，其石油醚相、乙醇相和毛云芝乙酸乙酯相也具较强的还原能力，吸光值分别为0.342、0.26和0.325。　　 综合比较各提取物在抗氧化实验中的IC50值发现，黄乳牛肝菌、晶粒鬼伞、绒毛栓菌的乙醇相，毛云芝的乙酸乙酯相和乙醇相在各抗氧化实验中均显示出良好的抗氧化活性。而黄乳牛肝菌有机相的抗氧化作用高于晶粒鬼伞、毛云芝和绒边乳菇的有机相提取物。　　 3.以黄乳牛肝菌乙醇相为材料，Vc作为阳性对照，采用D-半乳糖小鼠衰老模型测定其体内抗氧化活性。结果表明：黄乳牛肝菌乙醇相可提高小鼠体内超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）的酶活力，降低丙二醛MDA的含量，其作用均达到或超过Vc在体内的抗氧化作用。高剂量的黄乳牛肝菌乙醇相可使小鼠的血清和肝组织的SOD的活力分别提高到467.7 U/mL和41.02 U/mgprot，GSH-px的活力分别提高到385.56个活力单位和3.15个活力单位，明显超过衰老组和空白组；MDA的含量分别降低到3.65nmol/mL和0.33 nmol/mgprot，明显低于衰老组和空白组。