赖氨酰氧化酶在大鼠急性脊髓损伤修复过程中的作用

摘要

目的:本研究旨在探讨赖氨酰氧化酶（LOX）能否在大鼠急性脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）修复过程中起着重要作用。　　方法:将96只成年雌性SD大鼠分为A、B、C、D四组，A组（n=30）为β-氨基丙腈组（β-Aminopropionitrile，BAPN，一种LOX活性抑制剂），B组（n=30）为氯化钴组（CoCl2，一种LOX表达促进剂），C组（n=30）为单纯损伤组（injury），D组（n=6）为正常对照组（sham）。在采用Allen’s方法成功地复制大鼠急性脊髓挫伤模型的基础上，设定相同打击力度。在损伤后不同时间段[1、3、7、14和30天（d），每个时间点n=6]切取实验脊髓段。采用免疫组化（IHC）和免疫印迹（Western blot）检测LOX在脊髓损伤组织中的表达，并分析A、B、C与D组之间差异性。应用BBB评分法评估损伤后大鼠后肢运动的恢复状态，同时分析A、B、C组不同时间段LOX表达与肢体运动恢复状态的相关性。　　结果:BBB评分结果显示氯化钴组（B）后肢运动的恢复状态分数明显高于β-氨基丙腈组（A）和单纯损伤组（C），且A组最低。免疫组化结果显示：在所有实验时间段脊髓损伤组（A、B、C组）的LOX阳性细胞数显著高于对照组。例如在损伤后1d，A、B、C组的LOX阳性细胞数/视野分别为27.46±3.5，64.67±3.0，和41.67±2.3，而对照组的LOX阳性细胞数只有6.04±0.2。进而，在所有实验时间段的LOX阳性细胞数，氯化钴组（B）高于（A、C组），而β-氨基丙腈组（A）低于单纯损伤组（C）。例如在损伤后3d，单纯损伤组（C）的LOX阳性细胞数升达顶峰46.34±3.4，对应之氯化钴组（B）和β-氨基丙腈组（A）阳性值分别为74.81±4.9和37.64±3.6。免疫印迹结果显示，与对照组（D）相比，氯化钴组（B）在损伤后1d LOX表达增加，3d达到高峰，7d时有所下降，14d和30d时明显减少；β-氨基丙腈组（A）与氯化钴组（B）和单纯损伤组（C）相比，LOX表达曲线基本相同，但表达率却比后者明显低弱，氯化钴组（B）LOX表达明显高于β-氨基丙腈组（A）和单纯损伤组（C）且β-氨基丙腈组（A）最低。相同时间段间两两比较都具有统计学意义（P＜0.05）。　　结论:SCI放大脊髓LOX表达。氯化钴强化 LOX表达加速脊髓损伤的愈合；而BAPN灭活LOX活性延缓损伤脊髓的恢复。BAPN和CoCl2引起LOX表达的改变与BBB大鼠后肢运动的恢复评分高低呈正相关，由此说明LOX作为重要的抗损伤因子促进急性脊髓损伤的修复。

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引言

第1章 实验研究

1.1 材料与方法

1.1.1 实验材料

1.1.2 实验方法

1.2 结果

1.2.1 免疫组化结果

1.2.2 免疫印迹测定结果

1.2.3各组BBB评分结果

1.3 讨论

1.3.1 SCI模型特点及选择

1.3.2 赖氨酰氧化酶在修复过程中的作用

1.3.3 赖氨酰氧化酶在脊髓损伤修复过程中的作用

1.4 小结

参考文献

第2章 综述: 赖氨酰氧化酶在组织修复过程中的作用

一、LOX的结构及分布

二、LOX的组织修复功能及机制

三、LOX与组织纤维化

参考文献

结论

致谢

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