天然抗氧化剂对乳腺癌MCF-7/ADM细胞的耐药逆转作用及机制研究

摘要

目的：多药耐药(MDR)是导致肿瘤化疗失败的主要原因，从多种中药单体或化合物中筛选高效低毒的肿瘤躲药耐药逆转剂是逆转耐药的策略之一。本研究以人乳腺癌细胞敏感株 MCF-7和耐药株 MCF-7/ADM为模型，从白藜芦醇(Res)、番茄红素(Lyc)、原花青素(PC)、叶黄素(Lut)、丹皮酚(Pae)、橙皮苷(Hes)、和阿魏酸(Fera)等7种天然抗氧化成分中筛选肿瘤 MDR逆转剂，并初步探讨其耐药逆转活性及作用机制，为临床上乳腺癌多药耐药性的治疗提供新的逆转方法。　　方法：(1)采用 MTT法对 Res、Lyc、PC、Lut、Pae、Hes和Fera七种抗氧化剂进行的细胞毒性及耐药逆转效果检测；(2)采用 MTT法检测叶黄素对敏感株 MCF-7和耐药株 MCF-7/ADM细胞的细胞毒性及耐药逆转作用；(3)采用激光共聚焦显微镜技术和流式细胞术检测叶黄素对敏感株 MCF-7和耐药株 MCF-7/ADM细胞内ADM蓄积的影响及细胞凋亡的变化。　　结果：(1)MCF-7/ADM细胞是人乳腺癌 MCF-7细胞经阿霉素(ADM)选择而建立的MDR细胞。本研究采用 MTT法，以MCF-7/ADM细胞为模型，对7种抗氧化剂进行体外筛选。结果表明，橙皮苷、丹皮酚在出现明显细胞毒性剂量的情况下，仍未出现明显的逆转作用。白藜芦醇2μg/ml，原花青素4μg/ml，番茄红素40μg/ml，叶黄素20μg/ml，阿魏酸3μg/ml，对 ADM的耐药倍数分别为1.28、1.27、1.43、1.39、1.09。而在敏感株MCF-7细胞，除了番茄红素，其他几种药物对ADM细胞毒性无明显影响。(2)在敏感株MCF-7和耐药株MCF-7/ADM细胞，测定不同浓度叶黄素与化疗药物合用时对肿瘤细胞的抑制作用，结果显示随着叶黄素浓度的逐渐增加，ADM及长春新碱(VCR)的细胞毒性性也逐渐增强。(3)ADM药物蓄积实验证明，叶黄素可剂量依赖性和时间依赖性的增加敏感株 MCF-7和耐药株 MCF-7/ADM细胞内阿霉素的蓄积量。细胞凋亡实验表明，40μg/ml叶黄素温育4h可使MCF-7/ADM细胞早期凋亡率从单用ADM的6.5％提高到8.5%，而对MCF-7细胞早期凋亡的影响较小。　　结论：脂溶性较好的抗氧化剂白藜芦醇、原花青素、番茄红素、叶黄素和阿魏酸对MCF-7/ADM细胞具有耐药逆转作用；而叶黄素与阿霉素、长春新碱合用时，在敏感株 MCF-7和耐药株 MCF-7/ADM细胞均具有增敏作用；其增敏的初步机制主要与增加细胞内抗癌药物的蓄积作用及诱导细胞凋亡相关。

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引言

第1章 天然抗氧化剂逆转乳腺癌多药耐药MCF-7/ADM细胞作用筛选

1.1 材料

1.2 方法

1.3 结果

1.4 讨论

1.5 结论

参考文献

第2章 叶黄素对人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药性逆转研究

2.1 材料

2.2 方法

2.3 结果

2.4 讨论

2.5 结论

参考文献

第3章 叶黄素逆转人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药性的机制探讨

3.1 材料

3.2 方法

3.3 结果

3.4 讨论

3.5 结论

参考文献

第4章 综 述

4.1乳腺癌多药耐药的主要相关机制

4.2 中药逆转乳腺癌多药耐药的策略

4.3 结语

参考文献

致谢

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