磨盘草化学成分和药效物质基础研究及香草酸的含量测定

摘要

目的：（1）以磨盘草石油醚、乙酸乙酯部位为研究对象，分析其中所含的化学成分。（2）研究磨盘草石油醚、乙酸乙酯部位利尿作用，初步探索利尿作用的物质基础。（3）研究磨盘草石油醚、乙酸乙酯部位抗炎作用，筛选抗炎有效成分。（4）初步研究磨盘草石油醚部位利尿作用机制。（5）建立高效液相色谱法，测定磨盘草中香草酸的含量。　　方法：（1）利用硅胶柱色谱及液相-质谱联用技术分析磨盘草石油醚和乙酸乙酯部位中的化学成分。（2）将磨盘草石油醚和乙酸乙酯部位拆分成不同极性流份，采用代谢笼法，小鼠水负荷模型，以氢氯噻嗪为阳性对照药，连续灌胃8天，测定给药后4小时总尿量，筛选出有效流份并进一步分析（3）将磨盘草石油醚和乙酸乙酯部位拆分成不同极性流份，通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀炎症模型，以醋酸地塞米松为阳性对照药，测定小鼠耳廓肿胀度，筛选抗炎有效流份并分析。（4）采用代谢笼法收集小鼠给药后 4 小时总尿量，测定尿液中钾离子浓度。将小鼠进行眼球取血并摘取肾脏，测定血清和肾脏中Na-K-ATP酶的浓度以及肾脏中碳酸酐酶的浓度。（5）色谱柱为Thermo BDS HYPERSIL C18色谱柱(5μm，4.6 mm×250 mm)；流动相：甲醇-0.1%甲酸（21∶79）等度洗脱；检测波长：260 nm；流速：1 mL/min；柱温30℃；进样量为10μL。　　结果：（1）磨盘草石油醚部位，通过硅胶柱色谱分离并鉴定出了4个化合物，通过液相-质谱联用技术鉴定出了1个化合物；磨盘草乙酸乙酯部位，通过硅胶柱色谱分离并鉴定出了1个化合物，通过液相-质谱联用技术鉴定出了9个化合物。（2）磨盘草石油醚部位利尿有效流份为50∶1（石油醚∶乙酸乙酯）流份；乙酸乙酯部位利尿有效流份为50∶1（氯仿∶甲醇）流份并从中分离得到2个化合物，经药效验证确定其中一个化合物为利尿有效成分并通过薄层色谱和红外光谱鉴定为齐墩果酸。（3）磨盘草石油醚部位抗炎活性流份为10∶1（石油醚∶乙酸乙酯）流份，从中分离得到1个化合物，经过药效验证确定为抗炎有效成分并通过薄层色谱和红外光谱鉴定为β-谷甾醇；乙酸乙酯部位抗炎活性流份为50∶1（氯仿∶甲醇）流份，从中分离得到2个化合物且经药效验证确定均为抗炎有效成分并通过薄层色谱和红外光谱鉴定为β-谷甾醇和齐墩果酸。（4）与空白组相比，氢氯噻嗪能显著升高尿液中钾离子浓度（P＜0.05），50∶1流份组没有显著性；与空白组相比，氢氯噻嗪能明显降低小鼠血清以及肾脏中Na-K-ATP酶的浓度（P＜0.05），50∶1流份组没有显著性；50∶1流份组对小鼠肾脏碳酸酐酶浓度均没有产生显著性影响，氢氯噻嗪有降低小鼠肾脏碳酸酐酶浓度的趋势。（5）香草酸在磨盘草中含量为94.98μg/g。　　结论：（1）通过对磨盘草石油醚、乙酸乙酯部位进行化学成分分析，为磨盘草深入研究提供依据。（2）磨盘草石油醚部位产生利尿作用的主要成分为50∶1（石油醚∶乙酸乙酯）组分，乙酸乙酯部位产生利尿作用的主要成分为齐墩果酸。（3）磨盘草石油醚部位产生抗炎作用的主要成分为β-谷甾醇，乙酸乙酯部位产生抗炎作用的主要成分为β-谷甾醇和齐墩果酸。（4）磨盘草石油醚部位可能不是通过促进钾离子排泄，抑制Na-K-ATP酶活性以及碳酸酐酶活性来达到利尿作用。（5）该方法简便、易操作、稳定性好，且重现性强，可用于磨盘草中香草酸含量的测定。

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