溶髓方对椎间盘软骨终板细胞凋亡的影响

摘要

目的:研究溶髓方在防治椎间盘软骨终板退变的作用机理。　　 方法:选取健康Wistar大白鼠36只，随机分为空白对照组、病理模型组和实验组。实验组和病理模型组采用手术造模方式建立动物模型，即沿大鼠C1-C7棘突做后正中切口，剥离椎旁肌肉，切除C1-C7的棘上、棘间韧带及两侧关节突关节后外1/2，诱发椎间盘加速退变;空白对照组做假手术，切开皮肤之后缝合。术后1周开始灌胃，实验组给溶髓方汤剂，病理模型组和空白对照组分别给生理盐水，每日一次，灌1个月，分别于手术后第10周、18周、36周对三组动物分别实施过度麻醉处死，完整取下包含上下椎体的椎间盘。对取下的颈椎标本做矢状位切片，小心分离软骨终板和椎间盘。按Thompson椎间盘退变病理分级标准[1]对颈椎间盘进行分级评定。将软骨终板石蜡包埋，切片。做HE染色和Tunnel染色，计数椎间盘软骨终板细胞凋亡数量，评估软骨终板退变状况。　　 结果:(1)椎间盘退变的组织学表现。10周时，空白对照组大鼠椎间盘组织结构基本正常。而病理模型组和实验组大鼠椎间盘均出现轻度退变表现，差别不明显。18周后空白组大鼠椎间盘出现轻微退变，但不明显，髓核皱缩，纤维环出现裂隙。病理模型组大鼠椎间盘退变明显，实验组大鼠椎间盘退变有所恢复，组织结构基本正常，与空白组无明显差异。36周后，空白对照组大鼠颈椎间盘与18周相比出现显著退变，且与病理模型组差异不大，而实验组椎间盘有轻度退变。(2)HE染色观察颈椎间盘细胞凋亡状况。术后10周病理模型组和实验组终板结构都出现局部消失，细胞密度降低，可见散在分布的凋亡软骨细胞和凋亡小体。术后18周病理模型组出现显著退变，实验组退变有所恢复，术后36周空白对照组和病理模型组退变均比较明显，椎间盘完全钙化，终板基本消失，实验组出现轻度退变。(3)TUNEL染色比较各组软骨终板内细胞凋亡率（TUNEL阳性细胞率）。软骨终板内的细胞凋亡主要发生在18周以后，在试验中我们可以发现，10周时，空白对照组、病理模型组和实验组软骨终板内凋亡细胞几乎均不可见。而18周时这种情况就发生了变化，空白对照组、病理模型组和实验组出现了明显差别，病理模型组凋亡细胞数目明显增多，空白对照组与实验组凋亡的细胞数量无显著差异。36周情况又有了较大变化，空白对照组和病理模型组凋亡细胞数量都比较多，且没有明显差别，而实验组细胞凋亡数目明显比前两组要少得多。　　 结论:(1)终板细胞凋亡是椎间盘发生退行性变的重要原因。(2)溶髓方可以延缓椎间盘退变过程，减慢软骨终板细胞的凋亡速度，恢复软骨终板的结构和功能。

目录

摘要

引言

1 实验材料和方法

2 椎间盘及软骨终板标本切片

3 椎间盘标本的观察

4 组织标本的评估

5 统计学分析

6 实验结果

7 讨论

结论

参考文献

附录

综述 椎间盘软骨终板的退变机理及相关实验研究概述

致谢

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