RSK4与BRCA1基因异常甲基化在乳腺癌发病机制中作用的研究

摘要

第一部分RSK4基因在乳腺癌中的表达及异常甲基化的研究　　目的:　　RSK4是核糖体蛋白S6激酶家族成员,属于丝/苏氨酸激酶,位于Ras-MAPKs途径的下游,是MAPK/ERK激酶途径中最主要的下游调控因子.RSK4可能参与了乳腺癌的发生,但RSK4究竟是一种癌基因还是肿瘤抑制基因,至今仍尚无定论.本研究的目的是在乳腺癌及癌旁正常组织标本中探讨RSK4基因的表达、甲基化状态及潜在的临床意义.　　方法:　　应用实时荧光定量( SYBR Real-time PCR)方法检测RSK4 mRNA在配对乳腺癌组织、癌旁正常乳腺组织中的表达情况;应用BPS (bisulfite sequencing PCR)方法检测配对乳腺癌组织、癌旁正常组织中RSK4基因甲基化情况.分析RSK4基因甲基化与乳腺癌主要临床病理特征参数之间的关系.　　结果:　　在49例配对的乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中,RSK4 mRNA在乳腺癌组织中的表达低于癌旁正常乳腺组织中的表达,有显著的统计学差异(p=0.002); RSK4 mRNA的表达与乳腺癌原发肿瘤的大小(p=0.022)和临床分期(p=0.002)有关,而与年龄、是否绝经、病理类型、淋巴结转移的情况、ER,PR、CerbB-2状态和Ki-67指数大小未见明显相关.RSK4启动子甲基化在乳腺癌组织高于癌旁,具有显著统计学差异(p=0.009);RSK4基因的甲基化状态与mRNA表达呈负相关(p=0.005);没有发现乳腺癌组织中RSK4基因的甲基化状态与乳腺癌的主要临床病理学参数之间存在显著统计学差异.　　结论:　　结果表明,RSK4基因启动子甲基化是导致乳腺癌RSK4基因表达沉默的重要机制,而且RSK4基因启动子的异常甲基化和功能失活可能是乳腺癌癌前病变或癌变早期的改变.在乳腺癌发生和演进的过程中,RSK4基因甲基化可能是一个有价值的分子标志.　　第二部分BRCA1基因在散发性乳腺癌中的表达及甲基化状态的研究　　目的:　　BRCA1基因的突变与家族遗传性乳腺的发生关系密切,但在散发性乳腺癌中很少发现BRCAI基因的突变.但大量的研究在不断的证实,在许多散发性乳腺癌中都发现了BRCAlmRNA和蛋白的表达减少.而DNA启动子CpG岛的异常甲基化是导致抑癌基因表达和功能缺失的机制之一.本研究目的是在散发性的乳腺癌和癌旁正常乳腺组织中BRCA1基因的表达情况、甲基化状态以及其潜在的临床意义.　　方法:　　应用实时荧光定量(SYBR Real-time PCR)方法检测BRCA1 mRNA在配对乳腺癌组织、癌旁正常乳腺组织中的表达情况;应用BPS(bisulfite sequencing PCR)方法检测配对乳腺癌组织、癌旁正常乳腺组织中RSK4基因甲基化情况.分析BRCA1基因甲基化与乳腺癌主要临床病理特征参数之间的关系.　　结果:　　在49例配对的乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中,BRCA1 mRNA在乳腺癌组织中的表达低于癌旁正常乳腺组织中的表达,有显著的统计学差异(p=0.001); RSK4 mRNA的表达与乳腺癌与发病年龄、是否绝经、原发肿瘤的大小、临床分期、淋巴结转移的情况、ER、PR、CerbB-2状态和Ki-67指数大小未见明显相关.BRCA1启动子甲基化在乳腺癌组织高于癌旁,具有显著统计学差异(p=0.007); BRCA1基因的甲基化状态与mRNA表达呈负相关(p=0.029);没有发现乳腺癌组织中BRCAI基因的甲基化状态与乳腺癌的主要临床病理学参数之间存在显著统计学差异.　　结论:　　部分散发性乳腺癌中BRCA1基因可能因启动子区CpG岛甲基化而非突变发生表达沉默.部分BRCA1基因高甲基化的肿瘤中展示了较好的临床预后特征.BRCA1基因不仅仅在家族遗传性乳腺癌中,在散发性乳腺癌中亦有可能是一个有价值的分子标志.　　第三部分散发性乳腺癌血浆中RSK4和BRCA1甲基化的初步研究　　目的:　　在乳腺癌患者的循环DNA检测重要基因的表观遗传学分子标记以及对乳腺癌进展的影响及潜在的预测作用被众多研究者广泛探讨.本研究对血浆中循环RSK4和BRCA1这两个重要的、具有不同致癌机制的基因的甲基化状态,评价分析这2个基因与乳腺癌主要临床病理特征之间的关系,并在此基础上进一步探讨在血浆循环DNA中检测这些基因甲基化对乳腺癌潜在的诊断价值.　　方法:　　在45例乳腺癌患者和15例乳腺良性病变患者的血浆标本中,运用BPS法对RSK4和BRCA1基因的甲基化状态进行检测、分析.　　结果:　　RSK4和BRCA1甲基化在乳腺癌患者的血浆中的水平较乳腺良性病变的患者稍高,有轻微的统计学差异(RSK4 p=0.042,BRCAl p=0.048).另外,我们还对RSK4和BRCA1基因甲基化做了相关性分析,Correlation coefficient (r)=-0.563,P=0.037,说明在乳腺癌中RSK4和BRCA1基因存在相关性.乳腺癌患者血浆中RSK4和BRCA1基因的甲基化状态与乳腺癌的主要临床病理学参数之间无统计学差异.在血浆中循环DNA中联合检测RSK4和BRCA1基因的甲基化日与增加乳腺癌发病风险之间无统计学意义.　　结论:　　RSK4和BRCA1基因的甲基化状态在散发性乳腺癌患者和乳腺良性病变患者血浆中有差异,但目前尚不能用联合检测血浆中RSK4和BRCA1基因的甲基化方法对高危乳腺癌患者进行风险预测.

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