白子菜对HepG2细胞（人肝癌细胞株）胰岛素抵抗的影响及其机制研究

摘要

目的：以白子菜提取物为研究对象，采用HepG2细胞，运用现代药理学研究方法，探讨白子菜对胰岛素抵抗的影响及其机制。　　方法：用葡萄糖临床检测试剂盒检测白子菜对正常HepG2细胞葡萄糖消耗的影响；用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测HepG2细胞的增殖；采用高胰岛素诱导方法，通过优化胰岛素浓度和胰岛素作用时间建立适宜的高浓度胰岛素诱发的细胞胰岛素抵抗模型；用葡萄糖临床检测试剂盒检测白子菜对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响；药物作用结束后收集细胞，细胞裂解液作用20min，于离心机上12000rp，4℃离心15min，取上清液分别采用葡萄糖-6-磷酸脱氢酶偶联比色法、乳酸脱氢酶偶联比色法、钼酸铵定磷法及蒽酮法测定胰岛素抵抗HepG2细胞内葡萄糖激酶(GK)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)的活性和糖原含量。　　结果：在含葡萄糖浓度为10.0mmol/L的DMEM培养基中，白子菜可促进正常HepG2细胞的葡萄糖消耗，作用最强为浓度1.0mg/mL；白子菜对HepG2细胞增殖无影响；将HepG2细胞臵于10-8mol/L的胰岛素中36h，HepG2细胞对胰岛素的作用产生抵抗；将细胞臵于不含胰岛素的培养基中48h，发现HepG2胰岛素抵抗细胞的葡萄糖消耗仍明显低于对照细胞，表明HepG2胰岛素抵抗细胞模型在48h内维持对胰岛素产生抗性的特征；白子菜能够促进胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗，作用最强为浓度1.0mg/mL；白子菜可降低胰岛素抵抗HepG2细胞内葡萄糖-6-磷酸酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的活性，增强葡萄糖激酶的活性和增加糖原含量，改善HepG2细胞胰岛素抵抗的状态。　　结论：白子菜可促进正常 HepG2细胞的葡萄糖消耗；白子菜对HepG2细胞增殖无影响；运用高胰岛素诱导培养法可以复制出稳定可靠的胰岛素抵抗HepG2细胞模型，HepG2胰岛素抵抗细胞模型在48h内维持对胰岛素产生抗性的特征；白子菜可明显地促进胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗；白子菜可降低葡萄糖-6-磷酸酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的活性，抑制胰岛素抵抗HepG2细胞的糖异生作用，从而减少细胞内源性葡萄糖的产生；增强葡萄糖激酶的活性，加快糖酵解的进行，增加胰岛素抵抗HepG2细胞的糖原含量，因此能够显著减轻胰岛素抵抗的状态。

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引 言

正 文

第一部分 白子菜对正常 HepG2 细胞的影响

1 实验材料和方法

2 实验结果

第二部分 白子菜对HepG2细胞胰岛素抵抗模型的影响

1 实验材料和方法

2 实验结果

第三部分 白子菜对HepG2细胞胰岛素抵抗的作用机制研究

1 实验材料和方法

2 实验结果

讨 论

结 论

存在的问题与展望

参考文献

附 录

综 述

致谢

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