声明
绪论
1 甘蔗的概述
1.1 甘蔗分类及起源
1.2 甘蔗的经济价值
1.3 甘蔗中糖转运的研究进展
2 SWEET家族研究进展
2.1 SWEET家族概述
2.2 SWEET家族的功能和调控研究
2.3 SWEET家族在甘蔗中的研究进展
3 本研究的目的和意义
第一章 甘蔗关键SWEET基因的功能鉴定
1 实验材料及仪器
1.1 植物材料
1.2 菌株及载体
1.3 实验试剂及仪器
2 实验方法
2.1 RNA提取及反转录
2.2 引物设计及PCR扩增
2.3 PCR产物纯化回收
2.4质粒提取
2.5 Gateway法构建酵母表达载体
2.6 Gateway法构建拟南芥表达载体
2.7大肠杆菌感受态的转化
2.8 酵母感受态制备和转化
2.9 农杆菌感受态化学转化
2.10 农杆菌转染拟南芥
2.11 转基因拟南芥的PCR鉴定
2.12 转基因拟南芥的筛选
2.13 三引物法鉴定纯和突变株
2.14 荧光定量PCR
2.15 拟南芥中糖含量测定
3 结果分析
3.1甘蔗SWEET13c,16a,16b的表达特征分析
3.2甘蔗SWEET13c,16a,16b在糖转运缺陷型酵母中转糖能力分析
3.3 转基因拟南芥的鉴定
3.4 过表达SsSWEET13c拟南芥糖含量的测定结果
3.5 过表达SWEET13c的拟南芥表型分析
4 讨论
第二章 调控甘蔗SWEET13c的转录因子鉴定
1 实验材料及仪器
1.1植物材料
1.2 菌株及载体
1.3 仪器及试剂
1.4培养基
2 实验方法
2.1 CTAB法提取基因组DNA
2.2 SWEET13c启动子区域顺式作用元件预测
2.3 SWEET13c启动子片段的引物设计及PCR
2.4 SWEET13c启动子片段的纯化回收
2.5 质粒提取
2.6 pBait-AbAi载体构建
2.7 大肠杆菌感受态的转化
2.8 酵母感受态的制备和转化
2.9 酵母单杂交的自激活验证
2.10 SsSWEET13c互作蛋白的文库筛选
2.11 酵母单杂交酵母文库筛选的质粒提取
2.12酵母单杂交文库筛选后的质粒测序
3 结果分析
3.1 甘蔗SWEET13c及其直系同源基因启动区域顺式作用元件分析和比较
3.3 pBait-AbAi诱饵载体的构建
3.4 SsSWEET13c启动子片的自激活验证
3.5 调控SsSWEET13c的转录因子鉴定
4 讨论
第三章 调控甘蔗SWEET13c的转录因子表达分析
1 实验材料及仪器
1.1 植物材料
1.2 仪器及试剂
2 实验方法
2.1 RNA提取
2.2 RNA样品检测
2.3 构建mRNA文库
2.4 转录组分析
2.5 加权基因共表达网络的构建
3 结果分析
3.1 SsSWEET13c及调控其转录因子在不同叶段的表达分析
3.2 SsSWEET13c及调控其转录因子在昼夜循环的表达分析
3.3 SsSWEET13c及调控其转录因子在不同发育时期的表达分析
3.4 转录调控因子对SsSWEET13c的调控模式分析
3.5 调控SsSWEET13c的关键转录因子的一对一单杂交鉴定
3.6 SsSWEET13c的共表达网络的构建
4 讨论
总结与展望
参考文献
攻读硕士学位期间参与的科研项目及主要成果
致谢
附录A 实验仪器
附录B 转录因子对应编号
附录C 糖含量测定
福建农林大学;
