细菌双组分系统YycF/YycG对肺炎链球菌荚膜多糖和磷壁酸多糖生物合成的调控研究

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

1实验材料

1.1菌株与质粒

1.2引物

1.3实验试剂和仪器

1.4实验动物

2实验方法

2.1 yycF基因缺陷菌的构建及鉴定

2.2肺炎链球菌的实验室转化

2.3 YycF蛋白的体外重组表达

2.4生长曲线

2.5细菌形态学观察

2.6全菌裂解液的制备

2.7 Western blotting

2.8 ELISA检测S.pn荚膜多糖和磷壁酸的含量变化

2.10 EMSA验证YycF蛋白与CPS和TAs合成相关启动子的结合

2.11实时荧光定量PCR（rt-qPCR）

2.12粘附侵袭实验

2.13 S.pn抗巨噬细胞吞噬实验

2.14细菌毒力实验

2.15统计学分析

3实验结果

3.1构建并验证JH1002(Pc-PcsB+)菌株

3.2构建并验证JH1003(Pc-PcsB+△yycF)菌株

3.3构建并验证JH1005(△yycG)菌株

3.4定量PCR验证yycF，yycG缺陷菌

3.5 YycF重组蛋白的诱导表达及纯化

3.6细菌生长情况

3.7全菌CPS和TAs含量改变

3.8 EMSA验证YycF蛋白（非磷酸化）与CPS和TAs合成相关基因启动子的结合

3.9 YycF负性调控TAs合成相关基因的表达

3.10 yycFG基因的缺失引起细菌毒力减弱

4讨论

全文总结

参考文献

文献综述:细菌YycF/YycG双组份系统的研究现状

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文题录