甲基化抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷对瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β/smad信号通路的影响

摘要

本研究分为三部分：　　第一部分：磷酸化smad2(P-smad2)、磷酸化smad3(P-smad3)在瘢痕疙瘩及正常皮肤组织中表达水平差异的研究　　目的:使用免疫组化分析磷酸化smad2(P-smad2)、磷酸化smad3(P-smad3)蛋白在瘢痕疙瘩及正常皮肤组织中的表达差异。　　方法:收集48例经手术切取的瘢痕疙瘩组织及48例正常皮肤组织。免疫组化检测P-smad2及P-smad3，在200倍和400倍镜下观察这两种蛋白的表达分布情况。　　结果:在瘢痕疙瘩组织中，P-smad2及P-smad3蛋白的阳性率均高于正常皮肤组织(p＜0.05)。　　结论:P-smad2及P-smad3蛋白在瘢痕疙瘩组织中高表达，与正常皮肤表达水平的差异提示它们可能参与了瘢痕疙瘩的形成，为后续相关药物治疗机理的研究提供了一定基础。　　第二部：分瘢痕疙瘩及正常皮肤组织成纤维细胞的体外培养与5-氮杂-2-脱氧胞苷对该成纤维细胞的生长周期及凋亡的影响　　目的:原代提取并培养足够数量的瘢痕疙瘩及正常皮肤组织成纤维细胞，使用甲基化抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷进行干预，流式细胞学分析瘢痕疙瘩组织成纤维细胞细胞周期及凋亡的变化。　　方法:组织块培养法培养瘢痕疙瘩及正常皮肤组织，获得的成纤维细胞使用5-氮杂-2-脱氧胞苷进行干预，流式细胞学分析细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡。　　结果:培养的瘢痕疙瘩及正常皮肤组织块约7天可观察到成纤维细胞从中“爬出”。14天后细胞可长满整个培养瓶（规格:50毫升）。5-氮杂-2脱氧胞苷干预后，瘢痕疙瘩成纤维细胞处于G0/G1期的比例增加，细胞凋亡也较对照明显增多。正常皮肤成纤维细胞于药物干预前后未发现显著变化。　　结论:5-氮杂-2-脱氧胞苷干预后，瘢痕疙瘩成纤维细胞处于G0/G1期的比例增加，细胞凋亡也较对照明显增多，表明5-氮杂-2-脱氧胞苷能够有效抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖，并促进其凋亡。　　第三部分：5-氮杂-2-脱氧胞苷对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞相关因子的影响　　目的:研究5-氮杂-2-脱氧胞苷体外干预瘢痕疙瘩及正常皮肤组织成纤维细胞后，TGF-β/Smad信号通路相关蛋白的表达变化。　　方法:凝胶电泳PCR检测瘢痕疙瘩及正常皮肤组织成纤维细胞在5-氮杂-2-脱氧胞苷干预前后胶原蛋白Ⅰ(Coll-Ⅰ)的mRNA表达变化，Westernblot检测各组P-smad2、P-smad3、TGF-β1、smad7、Coll-Ⅰ蛋白的表达变化。　　结果:5-氮杂-2-脱氧胞苷干预后，瘢痕疙瘩成纤维细胞的Coll-Ⅰ mRNA表达下降，P-smad2、P-smad3、TGF-β1、Coll-Ⅰ蛋白表达下降，smad7蛋白表达回升。而正常皮肤成纤维细胞在药物干预前后无明显差异。　　结论:5-氮杂-2-脱氧胞苷作用瘢痕疙瘩成纤维细胞后，TGF-β/Smad信号通路中TGF-β1表达减少，抑制型smad因子smad7表达增多，抑制了smad2及smad3的磷酸化（P-smad2、P-smad3表达下降）。该信号通路的抑制最终导致瘢痕相关性胶原蛋白合成减少。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

第一部分 磷酸化smad2(P-smad2)、磷酸化smad3(P-smad3)在瘢痕疙瘩及正常皮肤组织中的表达

1．材料与方法

2．结果

3 结论

第二部分 瘢痕疙瘩及正常皮肤组织成纤维细胞的体外培养和5-氮杂-2-脱氧胞苷对其细胞周期及凋亡的影响

1 材料与方法

2．结果

3 结论

第三部分 5-氮杂-2-脱氧胞苷对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞相关因子的影响

1 材料与方法

2 结果

3 结论

全文小结

参考文献

文献综述 瘢痕疙瘩的发病基础及临床研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文