miR-26b在放射性肺损伤中的作用及其机制的初步研究

摘要

放射性肺损伤(Radiation-induced lung injury，RILI)是胸部肿瘤放疗后常见并发症之一，如肺癌、乳腺癌等癌症的放疗后。放射性肺损伤的早期主要表现为放射性肺炎，后期部分患者可发展为肺纤维化，严重影响患者的生活质量，并且明显缩短患者的生存时期。　　microRNA（miRNA）一直是近些年研究的热点。miRNA是一类内源性非编码小RNA分子，长度在18-22nt之间。miRNA的表达极为广泛，几乎包涵了所有的生物，如植物、动物和病毒等。目前miRNA的研究也较为深入，主要是在转录水平上调控基因的表达，它通过结合靶基因的3’非翻译区抑制翻译或增强靶mRNA的降解。人基因组中约60％的基因都受到 miRNA的调控。近年来，越来越多研究表明电离辐射可以诱导miRNA差异表达，miRNA的异常表达可能与肿瘤细胞辐射敏感性具有一定的相关性。因此，miRNA可能作为一个潜在的新的放疗增敏靶点，有望在未来在临床上得到广泛应用。　　目前关于miRNA与放射性肺损伤之间的研究还不是很多，具体的生物学机制也不清楚。本课题是为了揭示miRNA与放射性肺损伤之间的关系，体外初步探讨miRNA对放射性肺损伤发生的影响及相关机制。作者通过查阅大量文献，发现microRNA-26b(miR-26b)可能是一个潜在的较为重要的miRNA，认为miR-26b可能在放射性肺损伤中发挥着非常重要的作用。作者采用人的支气管上皮细胞HBE作为细胞模型，暴露于不同的辐射剂量，发现电离辐射会显著上调miR-26b的表达水平；接着采用转染技术，在干扰HBE细胞中miR-26b的表达后重新暴露于电离辐射中；然后采用CCK8检测其对细胞增殖能力的影响，通过流式细胞术分析miR-26b转录抑制对HBE细胞周期分布的影响。实验结果表明：电离辐射暴露条件下会上调HBE细胞中miR-26b的表达水平；干扰HBE细胞miR-26的表达后，电离辐射会显著促进HBE细胞增殖，干扰miR-26b后暴露于电离辐射下会影响HBE细胞周期，阻滞在G2/M期；通过生物信息学分析，发现CCND2可能是miR-26b的靶基因，miR-26可以靶向负调控CCND2的表达。通过上述研究，作者发现miR-26b在体外参与对人支气管上皮细胞HBE增殖及放射敏感性的调控，其作用机制可能与其对细胞周期等相关蛋白的表达调控有关，然而具体的作用途径和分子机制还有待进一步的深入研究。

目录

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英文缩写索引

第一章 绪论

1.1 研究背景及意义

1.2 国内外研究现状与趋势

1.3 论文结构

第二章 放射性肺损伤研究状况

2.1 放射性肺损伤的类型

2.2 临床表现

2.2.1 急性放射性肺损伤表现

2.2.2 慢性放射性肺纤维化的临床表现

2.3 放射性肺损伤的机制

2.3.1 细胞凋亡

2.3.2 细胞因子、酶类

2.4 毒性评价和分级

2.5防治措施及治疗进展

2.5.1 预防

2.5.2 治疗

2.5.3治疗进展

2.5.4 本项目研究背景及意义

第三章 miR-26b在放射性肺损伤中的初步功能研究

3.1 材料与方法

3.1.1 实验仪器、材料、试剂

3.1.2实验方法

3.2 结果与分析

3.2.1 电离辐射可以改变HBE细胞中miR-26b的表达水平

3.2.2 干扰miR-26b支气管上皮细胞模型的建立

3.2.3 miR-26b对HBE细胞生长的影响

3.2.4 干扰miR-26b后暴露于电离辐射对 HBE细胞周期的影响

3.2.5 miR-26b靶基因的预测

3.2.6 miR-26靶向调控靶基因CCND2 的表达

3.3 结果讨论

第四章 结论与展望

4.1 结论

4.2展望

致谢

参考文献

个人简历、在学期间发表的学术论文及取得的研究成果