db-cAMP和Taxol联合应用促进脊髓损伤后新生SD大鼠背根神经节神经元轴突生长的体外实验研究

摘要

目的：在模拟脊髓损伤微环境下观察db-cAMP和Taxol联合应用对新生SD大鼠背根神经节神经元轴突再生的影响。　　方法：①成年雌性 SD大鼠采用Allen的改良方法制作截瘫模型：实验随机分组：手术组7只、假手术对照组7只、对照组7只；根据改良Allen方法制作T9完全性截瘫SD大鼠模型，1w后取T8~T10节段脊髓并分离、过滤形成组织匀浆并制备脊髓提取液；②使用新生SD大鼠并取背根神经节然后行神经元分离、培养和鉴定；③实验1：分组培养2d，采用免疫荧光染色技术，并测量轴突生长平均长度和轴突远端平均微管荧光密度，最后观察完全性截瘫 SD大鼠脊髓提取液对轴突生长是否有影响（A组，50μl手术组脊髓提取液+DRGNs；B组，50μl假手术组脊髓提取液+DRGNs；C组，50μl对照组大鼠脊髓提取液+DRGNs；D组，50μl PBS+DRGNs）。实验2：分组培养1d、2d，采用免疫荧光染色技术，并测量轴突生长平均长度和轴突远端平均微管荧光密度，最后观察在模拟脊髓损伤微环境下 db-cAMP、Taxol分别与联合应用对轴突生长是否会产生影响（A组，50μM db-cAMP+2nM Taxol+50μl完全性截瘫大鼠脊髓提取液+DRGNs；B组，50μM db-cAMP+50μl完全性截瘫大鼠脊髓提取液+DRGNs；C组，2nM Taxol+50μl完全性截瘫大鼠脊髓提取液+DRGNs；D组，50μl完全性截瘫大鼠脊髓提取液+DRGNs；E组，50μlPBS+DRGNs）。　　结果：①实验1:共同培养2d后，轴突生长平均长度，A组为47.7±3.2μm，B组为144.1±3.7μm，C组为137.1±3.8μm，D组为142.7±5.5μm。单因素方差分析示：A组与B、C、D组之间，P<0.01,有显著统计学差异。轴突远端平均微管荧光密度，A组为65.1±1.5AFU/μm，B组为195.2±2.4AFU/μm， C组为195.4±2.5AFU/μm， D组为175.1±2.9AFU/μm。A组与B、C、D组之间，P<0.01,有显著统计学差异。②实验2：共同培养1d后，轴突平均长度，A组为168.3±4.7μm，B组为157.2±4.3μm，C组为135.2±4.8μm，D组为47.3±4.2μm，E组为136.8±4.3μm。单因素方差分析示：D组与A、B、C和E组之间，P<0.01,有显著统计学差异。2d后，轴突平均长度，A组为174.8±3.2μm，B组为165.2±3.4μm， C组为143.5±3.8μm，D组为44.2±2.5μm，E组为142.6±1.8μm。单因素方差分析示：D组与 A、B、C和 E组之间，P<0.01,有显著统计学差异。C组与A和B组之间，P<0.05,有显著统计学差异。A组与B、C、D和E组之间，P<0.01,有显著统计学差异；C组与E组之间，P>0.05,两者无统计学差异；C组与B组之间，P<0.01,有显著统计学差异。轴突远端平均微管荧光密度，A组为384.6±3.2AFU/μm，B组为364.3±2.9AFU/μm，C组为202.1±2.2AFU/μm，D组为60.7±2.8AFU/μm，E组为180.9±3.3AFU/μm。D组与A、B、C、和E组之间，P<0.01,有显著统计学差异。A组与B、C、D和E组之间，P<0.01,有显著统计学差异；C组与B组之间，P<0.01,有显著统计学差异。　　结论：①完全性截瘫大鼠脊髓提取液对新生SD大鼠DRGNs轴突生长有抑制作用，通过前期实验结果，也表明完全性截瘫大鼠脊髓提取液可模拟脊髓损伤的微环境，抑制新生SD大鼠DRGNs轴突再生；②单独应用适合剂量的db-cAMP和Taxol能促进轴突再生，生长锥形成。联合应用db-cAMP和Taxol对新生大鼠DRGNs轴突生长促进作用比单一应用更为明显，形成多个分支、甚至神经网，生长锥更加粗大。

目录

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 主要实验试剂

3 主要仪器

4 溶液配制

5 实验物品准备

2 实验方法

3 观察指标

4 统计学方法

结果

1 成年雌性SD大鼠截瘫模型脊髓提取液，对于新生大鼠DRGNs轴突生长的体外实验研究

2 db-cAMP和Taxol联合应用对新生大鼠DRGNs轴突生长的影响

讨论

1 SCI后db-cAMP促进轴突再生的机制

2 SCI后Taxol促进轴突再生的机制

3 在SCI后联合使用db-cAMP和Taxol对轴突再生的优势及不足

结论

参考文献

英文缩略词对照表

致谢

综述:CRMP-2与微管动态性的研究进展

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