美洛昔康、易孚在大鼠创面愈合过程中对Survivin、PTEN表达的影响

摘要

目的:本实验拟通过建立深度创面模型，旨在研究COX-2抑制剂、易孚在大鼠创面愈合中对Survivin、PTEN蛋白表达、瘢痕面积及创面愈合时间的影响，以期为预防、治疗病理性瘢痕（包含增生性瘢痕、瘢痕疙瘩）提供一种新的方式。　　方法:随机选取40只SD大鼠，背部脱毛后于脊柱两侧对称处做四处大小约10mm*5mm*1mm的深达肌层创面。以每组10只随机分配所有实验对象分别入A、B、C、D四组。其中A组为对照组，B组为美洛昔康组，C组为重组人表皮生长因子凝胶（易孚）组，D组为美洛昔康与易孚联合应用组。B、D组分别于术前1/2h及术后第2d、4d、6d、8d、10d于后肢肌肉注射0.05％美洛昔康0.8ml，同时A、C组于相同部位肌注生理盐水0.8ml。C、D组分别于术后立即、2d、4d、6d、8d、10d予以10ug/L易孚纱布湿敷创面，A、B组则以0.9％NS纱布湿敷，予以医用敷贴包扎固定。其后四组予以同样条件饲养，并于隔天更换敷料至愈合。于术后依据左上、右上、左下、右下次序按次于第3d、14d、28 d取各组创面，并分别行免疫组化染色、HE染色及观察各组创面愈合时间和计算瘢痕面积，取其均数进行比较。Survivin、PTEN图像分析方法:用Image-pr06.0图像分析软件系统，用IOD值代替表示Survivin、PTEN两者的表达强度。每张免疫组化染色切片在高倍镜下观察5个视野，分别测定每一张标本的每一个视野的IOD值，取5个视野的均数作为该标本的IOD值，并进行比较。结果:1、初始面积:四组两两比较P＞0.05，无统计学差异。2、愈合时间:C组最短，A、D组相近，但均比C组稍差，B组最长。3、PTEN:第3天时，四组组间比较P＜0.05，表明各组差异显著，有统计学意义;第14天时，A、C、D三组P＞0.05，三组未见统计学意义;B组与其他各组比较P＜0.05，组间差异显著，有统计学意义;第28天时，组间比较均出现P＞0.05，无统计学意义。但在PTEN表达强度上我们可以看出各组在同一时间点上，均有B组＞D组＞A组＞C组。4、Survivin:在第3天及在第28天时，在组间比较中，A、D两组P＞0.05，提示两组第3天及第28天的表达未表现出差异及统计学意义，B、C两组P＜0.05，表明Survivin的表达量在B、C两组间存在显著差异及统计学意义。在第14天时，四组均P＜0.05，表示组间比较存在显著差异，有统计学意义。而在表达量上我们可以看出在同一时间点上，均有C组＞D组＞A组＞B组。5、瘢痕质地: A组质硬，余三组质地较软，无明显差别。6、镜下见:第28天时，四组瘢痕比较，A组胶原纤维排列紊乱，局部漩涡状，而D组纤维细胞排列较紧密、有序，B、C组则介于A、D组之间。5、愈后瘢痕面积:A组＞B组＞C组＞D组，组间比较P＜0.05，存在显著差异，有统计学意义。结论:1、EGF可以有效促进Survivin表达及加快创面愈合，有利于降低瘢痕形成率;2、伤后PTEN与Survivin组织中的表达强度与创面状态相关;3、美洛昔康可以促进PTEN的表达及抑制Survivin的表达，可能与后期组织重塑相关;4、易孚与美洛昔康联合应用可有效地促进创面愈合并降低瘢痕形成率。

目录

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 主要实验试剂

3 主要实验仪器

4 主要实验试剂的配制

5 实验方法

结果

1．一般情况

2 大体及HE染色观察

3．PTEN、Survivin在创面愈合过程中的免疫组化染色结果

4．统计学及图像分析

讨论

一、Survivin

二、PTEN

结论

参考文献

略语表(Abbreviation)

致谢

综述 Survivin基因—病理性瘢痕基因治疗的一个潜在靶点

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