苏云金芽胞杆菌SigmaH调节子鉴定及其调节子spoVS基因功能分析

目录

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主要符号对照表

第一章 绪论

1.1 苏云金芽胞杆菌概述

1.2 苏云金芽胞杆菌在应用方面的局限性

1.2.1 遗传改良提升cry基因表达量

1.2.2 遗传改良延长Bt制剂持效性

1.3 苏云金芽胞杆菌的芽胞发育和晶体形成

1.3.1产胞细菌的芽胞结构及发育特点

1.3.2苏云金芽胞杆菌芽胞发育及晶体形成过程概述

1.3.3苏云金芽胞杆菌芽胞发育及晶体形成的调控机制

1.4 调控芽胞形成的Sigma（σ）因子

1.4.1过渡期的SigmaH（σH）因子

1.4.2芽胞中的SigmaF（σF）和SigmaG（σG）因子

1.4.3母细胞中的SigmaE（σE）和SigmaK（σK）因子

1.5 立题依据及目的意义

1.5.1立题依据

1.5.2研究内容

1.5.3目的意义

第二章 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 菌株与质粒

2.1.2 生化试剂

2.1.3 培养基和抗生素

2.1.4 溶液与缓冲液

2.2 实验仪器

2.3 实验方法

2.3.1 PCR扩增

2.3.2 PCR产物纯化、胶回收、质粒提取

2.3.3 酶切连接

2.3.4 大肠杆菌感受态制备及转化

2.3.5 苏云金芽胞杆菌感受态制备及转化

2.3.6 总RNA提取、RT-PCR、5’-RACE

2.3.7 β-半乳糖苷酶活性测定

2.3.8 目的蛋白的表达、纯化及定量

2.3.9 凝胶阻滞实验（EMSA）

2.3.10 同源重组法筛选突变体

2.3.11 细菌生长曲线测定

2.3.12 光学显微镜观察

2.3.13 激光共聚焦显微镜观察

2.3.14 芽胞形成率

2.3.15 Cry1Ac蛋白定量

第三章 结果与分析

3.1 受SigmaH（σH ）控制的基因的转录组数据分析

3.1.1 SigmaH生物信息学分析

3.1.2 转录组数据分析

3.1.3 SigmaH调节子表达量变化模式分析

3.1.4 SigmaH因子识别序列保守位点分析

3.1.5 枯草芽胞杆菌SigmaH调节子同源基因分析

3.2 SigmaH（σH ）调节子验证

3.2.1 SigmaH调节子转录活性分析

3.2.2 SigmaH蛋白表达及纯化

3.2.3 SigmaH蛋白的结合活性

3.3 SpoVS蛋白生物信息学分析

3.3.1 SpoVS蛋白一级结构分析

3.3.2 SpoVS蛋白三级结构分析

3.3.3 SpoVS蛋白在产胞菌中的分布

3.4 芽胞形成基因spoVS1和spoVS2转录调控分析

3.4.1 spoVS1和spoVS2基因转录起始位点确定

3.4.2 spoVS1和spoVS2基因转录活性分析

3.5 芽胞形成基因spoVS1和spoVS2生物学功能分析

3.5.1 spoVS1和spoVS2基因缺失菌株及恢复菌株构建

3.5.2 spoVS1和spoVS2基因对不对称隔膜形成的影响

3.5.3 spoVS1和spoVS2基因对芽胞释放的影响

3.5.4 spoVS1和spoVS2基因对芽胞形成率的影响

3.5.5 spoVS1和spoVS2基因对Cry1Ac产量的影响

3.5.6 spoVS1和spoVS2基因缺失对sigE转录活性的影响

3.5.7 SpoVS1和SpoVS2在Bc族细菌中的保守性分析

第四章 讨论

4.1 SigmaH因子的调节子比较

4.2 芽胞形成相关的spoVS基因比较

4.3 spoVS1和spoVS2缺失突变体表型的原因分析

4.4 HD(ΔspoVS1)和HD(ΔspoVS1ΔspoVS2)突变体的应用前景

第五章 结论

参考文献

致 谢

作者简历

附录A