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英文缩略表
第一章 绪论
1.1 蜱的概述
1.2 蜱唾液腺的生物学特性
1.2.1 蜱唾液腺的结构与功能
1.2.2 蜱唾液腺退化的现象
1.3 哺乳动物中的细胞程序化死亡
1.3.1 细胞自噬
1.3.2 细胞凋亡
1.3.3 细胞自噬和细胞凋亡的联络通路
1.4 节肢动物昆虫中的细胞程序化死亡
1.4.1 昆虫中的细胞自噬
1.4.2 昆虫中的细胞凋亡
1.4.3 昆虫中的细胞凋亡和细胞自噬的联络通路
1.5 蜱中细胞自噬和细胞凋亡的研究进展
1.6 本研究的目的和意义
第二章 镰形扇头蜱唾液腺退化时期细胞自噬和凋亡水平的动态检测和转录组分析
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 实验动物
2.2.2 实验试剂
2.2.3 实验仪器
2.3 实验方法
2.3.1 蜱唾液腺的形态学及透射电镜（ TEM）观察
2.3.2 TUNEL 染色
2.3.3 镰形扇头蜱唾液腺的转录组测序及其差异分析
2.3.4 RT-qPCR 检测
2.4 实验结果
2.4.1 不同吸血时间镰形扇头蜱唾液腺的体外形态学观察
2.4.2 不同吸血时间镰形扇头蜱唾液腺的透射电镜观察
2.4.3 不同吸血时间镰形扇头蜱唾液腺的 TUNEL 染色
2.4.4 不同吸血时间镰形扇头蜱唾液腺的转录组差异分析
2.4.5 蜱唾液腺退化过程中大部分自噬相关基因的转录水平无显著变化
2.4.6 蜱唾液腺退化过程中细胞凋亡相关基因的转录水平显著升高
2.4.7 蜱唾液腺退化过程中细胞自噬相关基因的转录高峰出现在细胞凋
2.5 讨论
第三章 蜱唾液腺中细胞自噬和细胞凋亡相关分子的初步鉴定
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 实验动物
3.2.2 实验试剂
3.2.3 实验仪器
3.3 实验方法
3.3.1 不同吸血时间镰形扇头蜱唾液腺总 RNA 的提取
3.3.2 cDNA 合成
3.3.3 自噬和凋亡相关基因的克隆与测序
3.3.4 细胞自噬和细胞凋亡基因的序列分析
3.3.5 自噬和凋亡相关基因的原核表达
3.3.6 重组蛋白的表达纯化
3.3.7 多克隆抗体的制备
3.3.8 Western blot 鉴定多克隆抗体
3.4 实验结果
3.4.1 细胞自噬和细胞凋亡基因的克隆
3.4.2 细胞自噬和细胞凋亡相关基因的序列分析
3.4.3 细胞自噬和细胞凋亡相关蛋白的表达纯化
3.4.4 多克隆抗体的鉴定
3.5 讨论
第四章 RhCaspase-7、-8、-9功能鉴定及其在蜱唾液腺退化中的作用机制
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 实验动物
4.2.2 商品化试剂
4.2.3 实验仪器
4.3 实验方法
4.3.1 不同发育阶段不同吸血时间镰形扇头蜱唾液腺总 RNA 的提取
4.3.2 cDNA 的合成
4.3.3 RT-qPCR
4.3.4 dsRNA 的合成
4.3.5 RNA 干扰
4.3.6 Western blot 检测
4.3.7 TUNEL 染色
4.3.8 真核表达载体的构建
4.3.9 真核质粒的共转染
4.4 实验结果
4.4.1 不同发育阶段、不同组织不同吸血时间 RhCaspase-7、-8、-9 的转录水平的变化
4.4.2 不同吸血时间唾液腺中 RhCaspase-7、-8、-9 的蛋白水平的变化
4.4.3 RhCaspase-7、-8、-9 的 RNAi
4.4.4 RhCaspase-7、-8、-9 之间的相互作用
4.5 讨论
第五章 RhATG5调控蜱唾液腺退化过程中细胞自噬向细胞凋亡的转化
5.1 引言
5.2 实验材料
5.2.1 实验动物
5.2.2 商品化试剂
5.2.3 实验仪器
5.3 实验方法
5.3.1 蜱唾液腺的体外培养和 20E 处理
5.3.2 TEM 检测
5.3.3 RT-qPCR
5.3.4 RhATG5 与 Calpain 蛋白酶的相互作用及活性位点的鉴定
5.3.5 TUNEL 染色
5.3.6 多克隆抗体的制备
5.3.7 Western blot 检测
5.3.8 间接免疫荧光（ IFAT）检测
5.3.9 唾液腺中 Ca2+浓度检测
5.3.10 dsRhATG5 的合成
5.3.11 RhATG5 的 RNAi（体内和体外）
5.4 实验结果
5.4.1 快速吸血期的唾液腺中 RhATG5 在发生剪切
5.4.2 快速吸血期唾液腺内 Ca2+浓度显著升高
5.4.3 一定浓度 Ca2+条件下 RhATG5 可被 Calpain 剪切
5.4.4 20E 可诱导蜱唾液腺的细胞程序化死亡
5.4.5 高浓度 20E 引起唾液腺中 Ca2+浓度升高介导 RhATG5 的剪切
5.4.6 抑制 RhATG5 的表达可减缓蜱唾液腺的退化
第六章 宿主自噬相关蛋白Beclin-1参与调节蜱唾液腺的退化
6.1 引言
6.2 实验材料
6.1 实验动物
6.2 实验试剂
6.3 实验仪器
6.3 实验方法
6.3.1 dsRNA 的合成
6.3.2 RhATG6 的 RNAi
6.3.2 蜱唾液腺的质谱检测
6.3.3 Western blot 检测
6.3.4 IFAT 检测
6.3.5 RT-qPCR 检测
6.3.6 蛋白间的相互作用
6.4 实验结果
6.4.1 干扰 RhATG6 可一定程度上抑制蜱的吸血
6.4.2 唾液腺质谱中发现了宿主来源的 Beclin-1 的特异性肽段
6.4.3 不同组织不同吸血时间宿主来源的 Beclin-1 的 western blot 检测
6.4.4 不同吸血时间血淋巴宿主来源 Beclin-1 的 IFA 检测
6.4.5 不同吸血时间唾液腺中宿主来源 Beclin-1 的 IFA 检测
6.4.6 显微注射重组蛋白 Beclin-1 可导致蜱唾液腺的细胞程序化死亡
6.4.7 宿主 Beclin-1 可被 RhCaspases 剪切
6.4.8 宿主来源的Beclin-1可与RhBCL-2结合
6.5 讨论
第七章 结论
参考文献
附录
致 谢
作者简历
中国农业科学院;
