超脉冲CO激光手术创口愈合的实验研究

摘要

实验目的：研究大鼠皮肤超脉冲CO<,2>激光手术创口的愈合,探讨超脉冲Co<,2>激光在临床应用中创口愈合延迟的机理,为其临床应用提供理论依据和临床指导. 实验方法：雄性SD大鼠72只,按随机原则编号;每只SD大鼠采用6W、16.8W两种不同功率超脉冲CO2激光及常规机械方法(常规组)对大鼠背部皮肤致创,6W激光组与常规机械方法为一组对比组(a组),另一组对比组为6W激光组116.8W激光组(b组),编号为奇数的a组在前,编号为偶数的b组在前,随机分成术后0,1,2,3,5,7,10,15,20d共9个时相点对创口进行取材,进行HE染色和TGF-β<,1>蛋白的测定,每个样本独立观察并计数成纤维细胞、中性粒细胞和TGF-β<,1>阳性细胞数;同时对术后3,5,7,10,15,20d共6个时相点的创缘组织进行超微结构观察. 结果：1.常规组和激光组皮肤创口均能于术后20d内工期愈合.常规组于术后8.96d愈合,激光创口愈合延迟,a组6W激光组术后12.81d愈合(P<0.01),且其延迟在激光能量有关,激光能量密度一致时,功率高者愈合更慢,b组6W激光组术后12.56d愈合,16.8w激光组术后14d愈合(P<0.05).2.激光组创缘均有明显的胶原变性带,变性带的范围与热损伤的范围有关:激光组创口收缩的发生时间晚于常规组,尤其是功率高的激光组,激光组创口开始收缩发生在术后5d以后,而常规组术后3d即可见明显的创口收缩;激光组创口术后早期创口干燥,中早期炎症反应较剧烈(P<0.01),尤其是频率高的激光组(P<0.05),常规组术后愈合的全过程中均未见明显的炎症反应.3.各组创口愈合经历炎症反应期、肉芽组织形成初期、肉芽组织旺盛期、肉芽组织消减期、疤痕愈合期和组织改建期6个阶段.激光组创伤愈合各时段滞后,愈合时间延长(P<0.01),早期炎症反应减弱,炎细胞渗出减少(与胶原变性带有关),肉芽组织增长缓慢,细胞增殖抑制(包括成纤维细胞、上皮细胞等),上皮覆盖延迟、毛囊、皮脂腺等皮肤附属器生成迟滞.表明激光具有明显的伤口愈合延迟效应.4.TGF-β<,1>表达特点:创伤刺激伤口周围成纤维细胞TGF-β<,1>的分泌增强,并具有时相性特点.激光组细胞TGF-β<,1>的分泌受到抑制,分泌时相异常,尤其是16.8W激光组TGF-β<,1>的表达表现为愈合全程的低表达状态(P<0.05).5.电镜观察结果:愈合早期,激光组组织内出现明显的组织淤血,且创缘组织呈现出明显的胶原损伤像,愈合中期胶原纤维生成延迟,持续时间延长.成纤维细胞是主要的修复细胞之一,参与创伤愈合的全过程.常规创伤愈过程中成纤维细胞急剧增多,经历增殖(伤后1-5d)、高峰(7-10d)和消减(>15d)三个时期的变化.依据超微结构特点可以分为过渡型成纤维细胞、增殖型成纤维细胞、合成分泌型成纤维细胞、肌成纤维细胞、转归型成纤维细胞和凋亡型成纤维细胞6种类型,在伤愈不同时期,成纤维细胞的类型分布不同.激光热损伤抑制伤口成纤维细胞增殖,发生缓慢,各型成纤维细胞出现滞后,持续时间延长,另外,激光组愈合过程中未见肌成纤维细胞,激光组新生胶原发生延迟,其中16.8w激光组创伤愈合过程中并出现特有的畸形成纤维细胞(术后5d可见成纤维细胞线粒体出现空泡化;术后20d成纤维细胞表现为特殊的狭长型,细胞内线粒体丰富,但无扩张).激光创口成纤维细胞超微结构变化和功能抑制,具有

目录

学位论文独创性声明及关于学位论文使用授权声明

前言

第一部分：创伤愈合的组织病理学观察

1.材料

1.1实验动物

1.2主要试剂

1.3仪器、设备

2.方法

2.1实验设计

2.2动物模型制备步骤

2.3取材

2.4切片制作

2.5苏木精、伊红染色(HE染色)

2.6观察和计数方法

3.结果

3.1创口愈合的大体观察结果

3.2HE染色切片观察结果

4.讨论

4.1中性粒细胞在创伤愈合中的作用

4.2成纤维细胞在创伤愈合中的作用

第二部分：创伤愈合过程中TGF-β1的免疫组化动态观察

1.材料

1.1实验动物

1.2主要试剂

1.3仪器、设备

2.方法

2.1实验设计

2.2动物模型制备步骤

2.3取材

2.4切片制作

2.5免疫组织化学染色技术

2.6观察和记数方法

2.7统计学分析

3.结果

4.讨论

第三部分：创伤愈合过程中成纤维细胞的超微结构特点

1.材料

1.1实验动物

1.2主要试剂

1.3仪器、设备

2.方法

2.1实验设计

2.2动物模型制备步骤

2.3取材

2.4切片制作

3.结果

4.讨论

全文结论

参考文献

附图(1-12)

附图(13-24)

附图(25-34)

附图(35-46)

综述细胞、细胞因子在创伤愈合中的作用

致谢