CD4+CD25+调节性T细胞对肝癌特异性CTL杀伤活性的影响

摘要

目的： 观察肝癌特异性CTL对肝癌细胞的特异性杀伤作用，观察Treg对肝癌特异性CTL杀伤活性的影响，探讨Treg在肿瘤免疫及DC疫苗治疗中的所起的作用。 方法： 1.取小鼠双侧股骨，分离并培养获得DC，在H22全细胞性抗原致敏后，与脾淋巴细胞共同培养，使其分化、增殖为肝癌抗原特异性CTL。 2.取小鼠脾淋巴细胞，免疫磁珠法分离获得Treg。 3.分别以H22细胞和8226细胞为靶细胞，设肝癌抗原特异性CTL为效应细胞，设未经H22全细胞性抗原致敏DC激活的脾淋巴细胞为对照组效应细胞，分别在效靶比为10:1、20:1、40:1观察效应细胞对靶细胞的杀伤作用。 4.根据上步的实验结果，选择最佳的效靶比，观察Treg不同浓度下对肝癌特异性CTL杀伤活性的影响，按Treg的不同浓度(0.0×104/ml、1.0×104/ml、2.0×104/ml、5.0×104/ml、1.0×105/ml、2.0×105/ml)分为六组。 杀伤活性的测定采用CCK-8，酶标仪检测450nm处吸收值(A值)。公式如下：杀伤活性(％)=[单纯靶细胞组A值-空白孔的A值-(实验组或对照组A值-效应细胞组A值)]/(单纯靶细胞组A值-空白孔的A值)×100％。 结果： 1.免疫磁珠法分离获得的Treg经流式细胞仪鉴定CD4与CD25双阳性率达99％以上。 2.肝癌抗原特异性CTL具有很强的对H22肝癌细胞的杀伤活性[在效靶比为10:1、20:1、40:1的杀伤率分别(25.3±3.2)％，(38.1±4.6)％，(54.4±4.1)％]，明显高于其对8226细胞的杀伤活性[在效靶比为10:1、20:1、40:1的杀伤率分别(11.3±2.6)％，(13.5±3.1)％，(14.2±3.5)％]，也明显高于未经抗原致敏DC刺激的脾淋巴细胞对H22肝癌细胞的杀伤活性[在效靶比为10:1、20:1、40:1的杀伤率分别(10.3±2.6)％，(12.5±3.1)％，(14.8±2.9)％]。 3.选择肝癌抗原特异性CTL与H22肝癌细胞的效靶比为40:1，加入不同浓度Treg后，对CTL杀伤活性均有不同程度的抑制，并且随Treg的浓度增高，抑制效果越加明显。但到5.0×105个/ml以后，再增加Treg浓度，其抑制效果未见明显增加。在加入Treg的浓度为0.0×104/ml、1.0×104/ml、2.0×104/ml、5.0×104/ml、1.0×105/ml、2.0×105/ml后，其杀伤率分别为(55.3±3.2)％，(40.0±2.8)％，(27.8±1.9)％，(20.9±2.5)％，(18.8±2.9)％，(16.7±1.8)％。 结论： 1.肝癌抗原特异性CTL对H22肝癌细胞有特异性杀伤活性。 2.Treg对肝癌特异性CTL的杀伤活性有抑制作用。

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论文说明：缩略词表

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引言

材料和方法

实验结果

讨论

小结

参考文献

综述一CD4+CD25+调节性T细胞与肿瘤免疫研究进展

综述二树突状细胞疫苗治疗肿瘤的研究进展

致谢

附录 在校期间发表的文章