基于毕赤酵母底盘的维生素K2(MK--4)细胞工厂构建与优化

目录

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摘要

第1章绪论

1．1维生素K

1．1．1维生素K的发现历程

1．1．2维生素K的性质

1．1．3维生素K2的功能与应用

1．1．4维生素K2的生物合成

1．2合成生物学及其应用

1．2．1合成生物学的概念

1．2．2合成生物学的研究内容

1．2．3合成生物学的应用

1．3蛋白表达系统

1．3．1重组蛋白表达系统

1．3．2毕赤酵母表达系统

1．4本论文研究的内容与意义

1．4．1研究意义

1．4．2研究内容

第2章大肠杆菌四烯甲萘醌生物合成途径的构建与优化

2．1引言

2．2材料与方法

2．2．1菌种和质粒

2．2．2主要试剂

2．2．3主要仪器设备

2．2．4培养基和溶液

2．2．5大肠杆菌MK-4生物合成途径的构建

2．2．6利用Red重组系统无痕敲除大肠杆菌pgi基因

2．2．7胞内产物的提取和检测

2．2．8胞内NADPH含量的检测

2．3结果与讨论

2．3．1大肠杆菌MK-4生物合成途径的构建

2．3．2大肠杆菌pgi基因缺失菌株的构建

2．4小结

第3章毕赤酵母四烯甲萘醌生物合成途径的理性设计

3．1 引言

3．2材料与方法

3．2．2 MK-4生物合成途径中关键酶HsUBIAD1的生物信息学分析

3．3结果与讨论

3．3．1毕赤酵母MK-4生物合成途径的理性设计

3．3．2 MK-4生物合成途径中关键酶HsUBIAD1的生物信息学分析

3．4小结

第4章毕赤酵母四烯甲萘醌生物合成途径的构建

4．1引言

4．2材料与方法

4．2．1菌种和质粒

4．2．2主要试剂

4．2．3主要仪器设备

4．2．4培养基和溶液

4．2．5 HsUBIAD1蛋白表达载体的构建

4．2．6构建产HsUBIAD1重组毕赤酵母

4．2．7高产HsUBIAD1重组毕赤酵母的筛选

4．2．8高产菌株蛋白表达条件的优化

4．3结果与讨论

4．3．1重组HsUBIAD1表达载体的构建

4．3．2高产HsUBIAD1重组毕赤酵母的筛选

4．3．3重组HsUBIAD1蛋白表达条件优化

4．4小结

第5章重组HsUBIAD1蛋白的纯化和鉴定

5．1引言

5．2材料与方法

5．2．1菌种和质粒

5．2．2主要试剂

5．2．3主要仪器设备

5．2．4培养基和溶液

5．2．6重组HsUBIAD1蛋白的酶学分析

5．2．7重组GGU-23菌株全细胞催化反应

5．2．8异戊烯基化产物的提取与检测

5．3结果与讨论

5．3．2重组HsUBIAD1蛋白的催化活性

5．3．3异戊烯基化产物的鉴定

5．4小结

第6章毕赤酵母四烯甲萘醌侧链生物合成途径的优化

6．1 引言

6．2材料与方法

6．2．1菌种和质粒

6．2．2主要试剂

6．2．3主要仪器设备

6．2．4培养基和溶液

6．2．5构建rDNA介导的多拷贝整合表达载体

6．2．6构建PpIDI和SaGGPPS融合表达载体

6．2．7构建GGU-GrG和GGU-GrIG重组毕赤酵母

6．2．8筛选GGU-GrG和GGU-GrIG重组毕赤酵母

6．3结果与讨论

6．3．1构建rDNA介导的多拷贝整合表达载体

6．3．2融合表达SaGGPPS和PpIDI强化侧链前体的供给

6．4 小结

第7章工程菌全细胞催化合成四烯甲萘醌的工艺优化

7．1 引言

7．2材料与方法

7．2．1菌种和质粒

7．2．2主要试剂

7．2．3培养基和溶液

7．2．4全细胞催化工艺的优化

7．3结果与讨论

7．3．1全细胞催化工艺的优化

7．3．2工程菌的传代稳定性

7．4 小结

第8章总结与展望

8．1 总结

8．2 展望

参考文献

致谢

在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果