全反式维甲酸(ATRA)及其衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR迁移的影响及其机制的初步探讨)对人胃腺癌细胞株BGC823

摘要

目的:研究全反式维甲酸(ATRA)及其衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR)对人胃腺癌细胞株BGC823迁移能力的影响及其可能机制。　　方法:不同浓度ATRA与ATPR处理胃腺癌BGC823细胞后,MTT法检测ATRA、ATPR对胃腺癌BGC823细胞增殖的影响;倒置显微镜观察细胞形态学变化;划痕法检测ATRA、ATPR对细胞迁移能力的作用;平板克隆实验检测ATRA、ATPR对细胞体外克隆形成能力的影响;免疫荧光实验观察ATRA与ATPR对BGC823细胞中Claudin-18在细胞中定位的影响;Real-time qPCR实验检测ATRA、ATPR对BGC823细胞MLCK mRNA水平的影响;Western blot实验检测ATRA、ATPR处理BGC823细胞48h后,MLCK、MLC、RARβ蛋白表达水平的变化。　　结果:ATRA可抑制BGC823细胞增殖,但抑制率较低,而同等浓度下ATPR对BGC823细胞增殖具有明显抑制作用,并呈浓度依赖。观察细胞形态,发现ATPR、ATRA均可使BGC823细胞生长变缓,且细胞密度降低、细胞由椭圆形变成梭形生长,而ATPR的上述作用明显强于ATRA。细胞划痕结果表明,ATPR与ATRA均可以降低BGC823细胞迁移率,经同等浓度和时间的药物处理后,ATPR较ATRA对BGC823细胞迁移的抑制效果更加明显。平板克隆实验结果显示,25μmol/L ATRA与ATPR处理BGC823细胞48h后,细胞克隆形成能力均有所降低,表现为形成的克隆数目减少,且单个克隆的平均细胞数减少,同样ATPR抑制细胞克隆形成的能力明显高于ATRA。观察免疫荧光图片,可以发现ATRA与ATPR均可以促使Claudin-18在BGC823细胞膜表面分布,与ATRA相比,ATPR促使Claudin-18在细胞膜表面的聚集现象更加明显。Real-time qPCR实验数据显示,ATRA与ATPR均可以降低BGC823细胞MLCK mRNA水平,而ATPR较ATRA效果更加明显,并有统计学差异。Western blot结果显示ATPR与ATRA均可以降低MLCK的表达,并且ATPR较ATRA下调受体RARβ的表达,以及降低MLC磷酸化的作用更加明显。　　结论:ATPR抑制胃腺癌BGC823细胞增殖和迁移的效果明显强于ATRA,ATPR抑制胃腺癌BGC823细胞迁移的机制可能是通过RARβ/MLCK信号通路来降低迁移相关蛋白MLCK表达和MLC的磷酸化水平。

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1.前言

2.材料与方法

2.1 仪器与设备

2.2 细胞培养

2.3 MTT法检测ATRA与ATPR对BGC823细胞增殖的影响

2.4 细胞形态学观察

2.5 细胞划痕实验检测ATRA与ATPR对BGC823细胞迁移的影响

2.6 平板克隆形成实验检测ATRA与ATPR对BGC823细胞克隆形成的影响

2.7 免疫荧光检测ATRA与ATPR对BGC823细胞中Claudin-18在细胞中定位的影响

2.8 Real-time qPCR 检测ATRA与ATPR对BGC823细胞 MLCK mRNA水平的影响

2.9 Western blot检测ATRA与ATPR对BGC823细胞相关蛋白表达的影响

2.10 统计学处理

3.实验结果

3.1 ATRA与ATPR对胃腺癌细胞BGC823增殖抑制作用

3.2 ATRA与ATPR对胃腺癌细胞BGC823形态的影响

3.3 ATRA与ATPR抑制胃腺癌细胞BGC823的迁移

3.4 ATRA与ATPR 抑制胃腺癌细胞BGC823克隆的形成

3.5 ATRA与ATPR 对胃腺癌细胞BGC823 Claudin-18在细胞中定位的影响

3.6 ATRA与ATPR 降低胃腺癌细胞BGC823 MLCK mRNA的表达水平

3.7 Western blot 检测ATRA与ATPR对相关蛋白表达的影响

4.讨论

5. 结论

6. 对本课题的进一步设想

参考文献

附录

致谢

综述