TSLP及尘螨抗原对肥大细胞TSLPR与腺苷受体表达的影响

摘要

目的:
　　 探讨小鼠肥大细胞株P815腺苷受体(ARs)及胸腺间质淋巴细胞生成素受体(TSLPR)的表达及胸腺间质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin，TSLP)与尘螨抗原对之的影响。
　　 方法:
　　 1.通过RT-PCR、免疫荧光染色法技术，检测P815肥大细胞腺苷受体及TSLP受体的表达情况。
　　 2.以不同时间、不同浓度的尘螨抗原刺激培养P815肥大细胞，采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞A2AR、A2BR、A3R及TSLPRmRNA变化，用Western blot法检测各组细胞A2AR、A3R蛋白水平的变化。
　　 3.TSLP联合尘螨抗原联合刺激培养P815肥大细胞，观察以上指标变化。
　　 4.具体实验选择刺激培养24hP815肥大细胞，①尘螨抗原刺激组分为:空白对照组（control组）;Derp组1（尘螨抗原0.001μg/ml）;Derp组2(尘螨抗原0.1μg/ml)。②尘螨抗原联合TSLP刺激组分为:空白对照组(control组)，TSLP组(10ng/ml);TSLP/Derp组1(TSLP10ng/ml联合尘螨抗原0.001μg/ml); TSLP/Derp组2(TSLP10ng/ml联合尘螨抗原0.1μg/ml)。用实时荧光定量PCR法和用Western blot法测定各组mRNA及蛋白水平的变化。
　　 结果:
　　 1.RT-PCR法、免疫荧光染色法检测P815肥大细胞膜表达A2AR、A2BR、A3R及TSLPR，不表达A1R。
　　 2.以不同浓度的尘螨抗原(0μg/ml、0.0001μg/ml、0.001μg/ml、0.01μg/ml、0.1μg/ml、0.5μg/ml)作用P815细胞24小时，发现尘螨抗原在0.5μg/ml浓度刺激培养引起细胞大量死亡;发现尘螨抗原0.001μg/ml、0.1μg/ml刺激浓度对P815肥大细胞上的ARsmRNA及TSLPRmRNA改变最明显。以尘螨抗原0μg/ml、0.001μg/ml、0.1μg/ml三个浓度分别刺激培养P815肥大细胞，观察培养2h、6h、12h、24h时，发现培养刺激24小时，P815肥大细胞上的ARs mRNA及TSLPR改变最明显。
　　 3.尘螨抗原刺激培养24hP815肥大细胞上ARs及TSLPRmRNA表达结果:①各组细胞A2ARmRNA比较:Derp组1、Derp组2较control组显著升高(P＜0.01);②各组细胞A2BRmRNA比较:Derp组1较control组、Derp组2显著升高(P＜0.01)，Derp组2与control组相比，差异无统计学意义(P＞0.05);③各组细胞A3RmRNA比较:Derp组1、Derp组2较control组显著升高(P＜0.05);④各组细胞TSLPRmRNA比较:Derp组1、Derp组2较control组显著升高(P＜0.05)。
　　 4.TSLP联合尘螨抗原刺激培养24hP815肥大细胞上ARs及TSLPRmRNA变化:
　　 结果①各组细胞A2ARmRNA比较:TSLP/Derp组2显著高于control组(P＜0.05)，TSLP组、TSLP/Derp组1与control组相比，差异无统计学意义(P＞0.05);②各组细胞A2BRmRNA比较:TSLP/Derp组2显著高于control组(P＜0.05)，TSLP组、TSLP/Derp组1与control组相比，差异无统计学意义(P＞0.05);③各组细胞A3RmRNA比较:TSLP/Derp组1、TSLP/Derp组2显著高于control组(P＜0.05)，TSLP组与control组相比，差异无统计学意义(P＞0.05);④各组细胞TSLPRmRNA比较:TSLP/Derp组1、TSLP/Derp组2显著高于control组(P＜0.05)，TSLP组与control组相比，差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 5.Western blot法检测尘螨抗原刺激培养24小时P815细胞上A2AR、A3R蛋白表达结果:各组A2AR、A3R蛋白与control组相比，差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 6.Western blot法检测TSLP联合尘螨抗原刺激培养24hP815细胞上A2AR、A3R蛋白表达结果:TSLP/Derp组1、TSLP/Derp组2A2AR蛋白表达显著高于control组(P＜0.01)，TSLP组与control组相比，差异无统计学意义(P＞0.05);各组A3R蛋白与control组相比，差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 结论:
　　 1.P815肥大细胞表达A2AR、A2BR、A3R、TSLPR，不表达A1R。
　　 2.尘螨抗原可直接刺激P815肥大细胞在基因水平上调A2AR、A2BR、A3R、TSLPRmRNA。
　　 3.单独以TSLP刺激P815肥大细胞，可上调P815肥大细胞TSLPRmRNA的表达，但对腺苷受体的表达没有改变。
　　 4.TSLP联合尘螨抗原刺激P815肥大细胞，可协同促进A2AR、A2BR、A3R及TSLPR表达的上调。

目录

主要英文缩略词索引

摘要

前言

材料与方法

1．主要仪器与实验材料

2．实验方法

实验结果

1．腺苷受体在P815细胞上的表达

2．以不同浓度的尘螨抗原作用不同时间，P815细胞ARs、TSLPRmRNA表达结果

3．QRT-PCR法检测尘螨抗原刺激培养24hP815细胞上ARs及TSLPRmRNA表达结果

4．QRT-PCR法检测尘螨抗原联合TSLP刺激培养24h P815肥大细胞上ARs及TSLPRmRNA变化

5．尘螨抗原与尘螨抗原联合TSLP刺激培养P815细胞24小时，ARs及TSLPRmRNA的表达变化比较

6．Western blot法检测尘螨抗原刺激培养24小时P815细胞A2AR、A3R蛋白的表达水平

7．Western blot法检测尘螨抗原联合TSLP刺激培养24小时P81 5细胞A2AR、A3R蛋白的表达水平

分析与讨论

1．TSLPR和四种ARs在体内的表达

2．尘螨抗原在哮喘发病中的作用

3．TSLP在哮喘发病中的作用

4．TSLP与肥大细胞的相互作用

5．腺苷受体对肥大细胞的免疫调节作用

结论

今后研究方向

参考文献

致谢

综述 TSLP在支气管哮喘中的作用

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