硝普钠对大鼠肝脏缺血再灌注损伤早期微粒体白三烯C4合成酶系及产物LTC4的影响

摘要

一段时间的缺血是许多肝脏外科手术所必需的,尤其涉及到较大范围的肝损伤时更是如此。在恢复高血流供应后,肝脏遭受更进一步的损害,加重缺血导致的业已存在的损伤,称为缺血再灌注(ischemia and reperfusion,I/R)损伤。肝脏I/R损伤是一个重大临床问题,在创伤、热损伤、血容量减少、内毒素休克、重建血管外科、肝移植和肝切除外科手术等情况下均有I/R参与其发生机制。许多实验显示I/R诱发的肝损伤分两个时期发生。在再灌注早期,内皮细胞肿胀,血管收缩,白细胞诱捕及血小板聚集在窦状隙导致微循环衰竭,缺血导致能量缺乏,使膜转运失效而致细胞内水肿,内皮和枯否细胞发生肿胀。NO/ET平衡失调导致血管进一步收缩,造成窦状隙狭窄,随之降低白细胞速度,白细胞和内皮细胞接触的频率升高,造成白细胞停滞。停滞的白细胞尽管不能完全阻塞窦状隙腔,却进一步造成肝微循环血流障碍,延长缺氧时间,使这一区域在再灌注开始后仍保持缺血,进而激活枯否细胞和中性白细胞。这些细胞产生炎症细胞因子和氧起源的自由基进一步加剧肝损伤。半胱氨酰白三烯(cysteinyl leukotrienes,Cys-LTs)是一类重要的前炎症花生四烯酸类物质,它由肝脏代谢分泌到胆汁,该作用呈ATP依赖性,其母体复合物LTC4由肝微粒体白三烯C4合酶(leukotriene C4 synthase,LTC4S)、微粒体谷胱甘肽S转移酶(microsomal glutathione S-transferase,mGST)2和mGST3催化LTA4和GSH结合形成。现已知人和鼠肝脏中均有LTC4S、mGST2和mGST3表达。有报道LTs关系到几种肝损伤,如急性肝坏死,肝硬化和败血症,但有关肝脏I/R损伤与LTs关系的研究较少。有研究表明I/R损伤肝组织LTC4含量较对照组显著升高，并伴随肝脏水肿增强和血浆ALT上升。但肝脏I/R损伤过程中用GST2和mGST3基因和蛋白表达有无变化，肝脏I/RR损伤是否影响肝微粒体LTC、合成酶系的活性尚不得而知。
　　Larfars等研究首次表明花生四烯酸代谢产物LTB4, LTC4和LTD4通过作用离体人多形核白细胞（PMN）表面受体，以G蛋白和[Ca2+]i依赖激活PMN释放NO。NO供体硝普钠（0.05mmo1/L,1mmol/L）灌流减弱了LTD4对胆汁流量、胆汁酸分泌及门静脉流量的影响，而LTD4对葡萄糖排出的作用未受影响。给予LTD4后门脉流量减少和胆汁量减少之间密切相关，当给予SNP后相关性减弱。此外LTB4浓度依赖性方式减弱了肝细胞NO合成，当肝细胞被细胞因子联合刺激或IL-1单独刺激时，降低的NO2-合成同降低的iNOS mRNA相关联显示iNOS的诱导被抑制，提示类花生酸类物质能调节离体肝细胞NO的合成。过去20多年的研究显示NO是心血管、神经和免疫系统主要的信息分子，参与了机体的多项生理和病理过程。体内肝血管内皮、血小板、神经末稍、肥大细胞和枯否细胞在内毒素、I/R损伤及循环性休克等刺激下可产生NO，其中起作用的自体生物活性物质有组织胺、血管活性肠肤、腺苷、ATP, 5-HT, P物质、缓激肤和降钙素基因相关肤等。NO在肝I/R损伤中的作用各家报道不一。有关NO是否及如何在肝脏I/R损伤早期影响微粒体谷肮甘肤S转移酶超家族成员(MAPEG)中LTC4合成酶(LTC4S, mGST2和mGST3)基因和蛋白表达、活性及其产物LTC4含量，其作用的分子机制如何尚未见报道。
　　本研究采用Pringle's法制作大鼠肝脏部分(70％左右)I/R损伤模型，观察了肝脏I/R损伤过程中微粒体LTC4合成酶基因和蛋白表达、酶活性和产物LTC4变化情况;另外以硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)作为外源性NO供体，在肝脏I/R损伤早期进行干预，从整体水平上观察了硝普钠对肝微粒体LTC4合成酶基因和蛋白表达、活性和产物LTC4的影响，并部分探讨了其作用的分子机制。

目录

中文摘要

英文摘要

第一部分

1、前言

2、实验材料

3、方法

4、结果

5、讨论

6、参考文献

第二部分

1、前言

2、实验材料

3、方法

4、结果

5、讨论

6、参考文献

第三部分

1、前言

2、实验材料

3、方法

4、结果

5、讨论

6、参考文献

一氧化氮供体在肝损伤中的作用机制研究进展

1、文献综述

2、参考文献

3、附录

4、致谢