腺病毒携带的反义细胞外信号调节激酶-2基因治疗减缓移植物血管和肾脏的慢性排斥反应

摘要

第一部分大鼠反义细胞外信号调节激酶-2腺病毒载体的构建 目的：正义基因反向克隆法构建大鼠anti-ERK2腺病毒载体。 方法：酶切质粒p3XFLAG-CMV7.1-ERK2，得到ERK2cDNA片段，连接到T载体进行测序，经测序正确反向克隆法插入质粒pShuttle中，最后转入AdEasy(tm)XLAdenoviralVectorSystem系统中得到anti-ERK2基因腺病毒载体。 结果：DraⅠ和NotⅠ双酶切鉴定anti-ERK2基因腺病毒载体，发现插入的基因序列与插入方向均符合预期目标。 结论：成功构建了大鼠anti-ERK2腺病毒载体，为研究移植排斥中ERK2基因治疗的作用提供了良好工具。 第二部分腺病毒携带的反义细胞外信号激酶-2基因治疗对移植物血管和肾脏慢性排斥反应损伤的保护作用 目的：探讨反义细胞外信号激酶-2基因治疗对移植物血管和肾脏的慢性排斥反应损伤的保护作用及可能的机制。 方法：选用血管移植(Brown-Norway→Lewis)和肾脏移植(Fisher344→Lewis)二种慢性排斥反应模型，移植前对同种血管移植物和肾脏移植物进行体外Adanti-ERK2基因转染，分别于血管移植后60天和肾脏移植后90天分析慢性排斥反应发生时移植物的结构和功能变化、目的基因和蛋白的表达以及免疫系统的相应反应。 结果：Adanti-ERK2基因治疗减少了移植物内ERK目的基因蛋白的表达，缓解了慢性排斥反应对同种血管移植物和肾脏移植物的损伤。空载病毒加剧了同种血管及肾脏移植物的损伤。Adanti-ERK2基因治疗减少慢性排斥反应发生时移植物内巨噬细胞和T淋巴细胞的浸润并减少血清中TNF-α及ICAM-1的表达。 结论：Adanti-ERK2基因治疗对移植物血管及肾脏有保护作用，可以减缓慢性排斥反应所造成的损伤。这种保护机制可能和减少移植物炎性细胞浸润和减少免疫相关细胞因子表达有关。

目录

全文缩略语表

前言

第一部分大鼠反义细胞外信号调节激酶-2腺病毒载体的构建

第二部分腺病毒携带的反义细胞外信号激酶-2基因治疗对移植物血管和肾脏慢性排斥反应损伤的保护作用

综述 丝裂原活化蛋白激酶通路在免疫反应中的作用

致谢