DTaP-HepB-sIPV联合疫苗加强免疫及sIPV与bOPV(Ⅰ型+Ⅲ型)联合序贯免疫的免疫原性研究

摘要

2015年1月14日，国家食品药品监督管理总局批准了全球首个Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（单苗）的生产注册申请。该疫苗是由中国医学科学院医学生物学研究所研发，通过采用现行脊髓灰质炎减毒活疫苗的生产毒株（Sabin株），经在Vero细胞生物反应器培养收获病毒，结合灭活疫苗生产工艺制备而成。
　　本论文旨在探讨Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Inactivated poliomyelitis vaccinemade from Sabin strain，sIPV)与吸附无细胞百日咳-白喉-破伤风(AdsorbedAcellular Pertussis Vaccine,Diphtheria Toxoid&Tetanus Toxoid Combined Vaccine,DTaP)及乙型肝炎（Hepatitis B，HepB）联合疫苗加强免疫后的细胞免疫效果以及sIPV与Ⅰ型+Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗(bivalent typeⅠ+Ⅲoral poliomyelitisattenuated live vaccine，bOPV)不同剂型联合序贯免疫接种的安全性和免疫原性比较。
　　本论文主要分为以下部分:
　　第一部分 研究比较不同剂量配比及制备工艺的DTaP-HepB-sIPV五联疫苗在Wistar大鼠中加强免疫的细胞免疫效果。共制备4组(A-D)实验性DTaP-HepB-sIPV五联疫苗，另制备6组(E、F、G、H、Q1、Q2)对照。另设一组疫苗参考品组:GSK上市疫苗InfanrixTM-hexa（DTaP-HepB-wIPV）。对已完成三剂基础免疫后的各组Wistar大鼠在全程免疫第16个月进行加强免疫，于加强免疫前及免后15、30天采血，采用流式液相多重蛋白定量技术(Cytometric Beads Array，CBA)检测各组血清样本中IFN-γ（Interferon-γ，IFN-γ）、肿瘤坏死因子（Tumor Necrosis Factor，TNF）、白细胞介素5(Interleukin-5，IL-5)、白细胞介素2(Interleukin-2，IL-2)、白细胞介素4(Interleukin-2，IL-4)五种细胞因子水平;于加强免疫后第30天，测定各组大鼠CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞、CD8+CD28+T细胞水平及CD45RA+CD27+记忆性B细胞水平。结果表明，细胞免疫方面，各联合疫苗可诱导机体迅速产生细胞免疫应答，联合疫苗组细胞因子在加强免疫后15天达到高峰。各组之间CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞、CD8+CD28+T细胞、CD45RA+CD27+记忆性B细胞水平差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　第二部分 比较sIPV与bOPV（糖丸剂型/液体剂型）以不同联合序贯免疫程序接种在2月龄婴儿中的免疫原性和安全性。采用随机、盲法、单中心、平行对照设计，选择广西壮族自治区柳州市≥2月龄的婴儿，各剂型按照sIPV+2bOPV和2sIPV+bOPV的序贯免疫程序分为4个免疫程序组，每组100人，按照0、28、56天的免疫程序，共接种3剂。免前和全程免疫后28天采血，采用细胞培养微量中和试验测定抗脊灰病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗体水平，计算抗体阳转（4倍增长）率。结果显示sIPV+2bOPV（糖丸）、sIPV+2bOPV（液体）、2sIPV+bOPV（糖丸）和2sIPV+bOPV（液体）各试验组严重不良事件发生率分别为6％、5％、6.06％和4％(p=0.9)，严重不良事件均与疫苗无关。全程免疫后，sIPV+2bOPV(糖丸)、sIPV+2bOPV(液体)、2sIPV+bOPV(糖丸)、2sIPV+bOPV(液体)各试验组抗脊灰病毒Ⅰ型中和抗体GMT分别为1∶4539.68、1∶6243.43、1∶6819.53、1∶7916.29;Ⅱ型分别为1∶12.98、1∶10.54、1∶63.75、1∶84.21;Ⅲ型分别为1∶1172.55、1∶1416.03、1∶2648.89、1∶3250.75。各试验组Ⅰ型抗体阳转（4倍增长）率分别为98.85％、100.0％、98.86％、98.91％;Ⅱ型分别为47.13％、56.63％、79.55％、79.35％;Ⅲ型分别为100.0％、98.80％、100.0％、98.91％。结果证明相同序贯免疫程序中，糖丸剂型与液体剂型bOPV在≥2月龄的婴儿中均具有良好的安全性和免疫原性。相同剂型不同免疫程序中，2剂sIPV组较于1剂sIPV组产生更高的血清中和抗体水平，尤其表现在Ⅱ型、Ⅲ型免后中和抗体GMT水平的差异。

目录

摘要

第一部分 DTaP-HepB-sIPV联合疫苗加强免疫的细胞免疫研究

前言

1 材料

1．1 实验动物

1．2 抗原及疫苗

1．3 细胞

1．4 主要试剂

1．5 主要耗材和仪器

1．6 主要试剂配制方法

2 方法

2．1 蛋白含量测定

2．2 DTaP-HepB-sIPV五联疫苗及DTaP、HepB、sIPV对照疫苗的制备

2．3 疫苗成品检定

2．4 实验动物分组

2．5 动物加强免疫和采血

2．6 加强免疫前体液免疫水平测定

2．7 加强免疫后细胞免疫应答水平的测定

3 结果与分析

3．2 加强免疫后动物生长状况的观察

3．3 加强免疫前大鼠体液免疫水平

3．4 加强免疫后30天Wistar大鼠外周血T淋巴细胞亚群分群分析

3．5 CBA测定IFN-γ、TNF、IL-5、IL-4、IL-2细胞因子结果

4 讨论

5 小结

第二部分 sIPV与bOPV(Ⅰ型+Ⅲ型)联合序贯免疫的免疫原性研究

前言

1 材料

1．1 试验对象

1．2 疫苗

1．3 细胞

1．4 主要试剂

1．5 主要耗材与仪器

1．6 主要试剂配制方法

2 方法

2．1 受试对象入组及随机分组

2．2 接种疫苗和采血

2．3 细胞培养微量中和试验检测脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体

3 结果与分析

3．1 受试者基本情况

3．2 脊髓灰质炎中和试验结果

4 讨论

5 小结

参考文献

附录

致谢

个人简历

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