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奥曲肽通过抑制Wnt/β-catenin信号通路及下游细胞周期蛋白D1和c-Myc减轻肝纤维化和抑制肝星状细胞的增殖与活化

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1 前言

2 实验材料

2.1实验细胞与动物

2.2试剂与药品

2.3设备与仪器

3 实验方法

3.1大鼠肝纤维化模型的建立

3.2 SD大鼠血样本指标的检测

3.2.1 检测SD大鼠血样本AST

3.2.2 检测SD大鼠血样本ALT

3.2.3 检测SD大鼠血样本TBIL

3.2.4 检测SD大鼠血样本ALB

3.3.2大鼠肝组织Masson染色

3.3.3大鼠肝组织免疫组织化学染色

3.4细胞培养

3.4.1 人肝星状细胞LX-2的复苏与培养

3.4.2人肝星状细胞LX-2的传代

3.5 MTT法

3.6Western blot

3.6.1大鼠肝组织/细胞总蛋白的提取

3.6.2 BCA总蛋白定量

3.6.3实验中所用液体的配制

3.6.4聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)

3.6.5转膜(湿转法)

3.6.6蛋白免疫印迹

3.7.1提取大鼠肝组织/细胞总RNA

3.7.2 RNA的定量

3.7.3 cDNA的合成

3.7.4引物的序列

3.8数据处理

4 实验结果

4.1.1奥曲肽对大鼠肝纤维化模型病理学改变的影响

4.1.2奥曲肽对大鼠肝纤维化模型血清相关指标变化的影响

4.2 奥曲肽对大鼠肝纤维化模型中α-平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原表达变化的影响

4.2.2 免疫组织化学检测 α-平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原在大鼠肝纤维化模型中的表达变化

4.3 奥曲肽对大鼠肝纤维化模型中Wnt1、β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期蛋白D1表达水平的影响

4.3.1Western blot和(或)qRT-PCR检测Wnt1、c-Myc、β-连环蛋白和细胞周期蛋白D1在大鼠肝纤维化模型中的表达变化

4.3.2 免疫组化检测Wnt1和β-连环蛋白在大鼠肝纤维化模型中的表达变化

4.4 奥曲肽对人肝星状细胞LX-2增殖的影响

4.4.1 奥曲肽对人肝星状细胞LX-2毒性的检测

4.4.2奥曲肽对活化的人肝星状细胞LX-2增殖的影响

4.5奥曲肽对人肝星状细胞LX-2中α-平滑肌肌动蛋白和I型胶原表达变化的影响

4.6 奥曲肽对人肝星状细胞 LX-2 中 Wnt1、c-Myc、β-连环蛋白和细胞周期蛋白D1水平变化的影响

讨论

结论

参考文献

附录

致谢

综述:Wnt信号通路在肝纤维化中的研究进展

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