声明
中英文缩略词表
1 引言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 仪器耗材
2.1.2 实验所用细胞系
2.1.3 实验动物来源
2.1.4实验相关试剂
2.1.5实验相关干扰RNA序列
2.1.6实验中所用相关引物
2.2.1细胞的复苏
2.2.2细胞的换液
2.2.3细胞的传代
2.2.4细胞的冻存
2.2.5细胞总RNA的提取
2.2.5 RNA的逆转录(即cDNA的合成)
2.2.5 mRNA的实时荧光定量 PCR实验
2.2.6 microRNA的实时荧光定量 PCR实验步骤
2.2.7 miRNA mimics及miRNA inhibitor细胞转染
2.2.8质粒转染
2.2.9构建目的基因稳定表达细胞系
2.2.10蛋白质免疫印迹(Western blot)实验
2.2.11 STAT3(小鼠)-WT(野生型)载体及STAT3-MUT(突变型)载体构建过程
2.2.12 双荧光素酶基因报告分析
2.2.13 MTT实验(细胞增值实验)
2.2.14 细胞平板克隆形成实验
2.2.15 裸鼠成瘤实验
2.2.16 免疫组化
2.2.17 HE染色
2.2.18 数据处理及统计分析
3 结果
3.1 TSC1或者TSC2复合物的缺失可导致STAT3表达的上调
3.2 TSC1或TSC2复合物的缺失可导致miR-125b-5p表达的下调
3.3 活化的mTORC1即可以上调STAT3以及下调miR-125b-5p的表达
3.4 mTORC1是通过下调miR-125b-5p的表达来促进 STAT3表达的上调
3.5 在具有超活化的mTORC1的细胞中miR-125b-5p的过度表达可以抑制细胞增殖和肿瘤生长
3.6 STAT3是mTORC1信号传导下游的miR-125b-5p的功能靶标
4 讨论
5 结论
参考文献
附录
致谢
综述:miR-125b与肿瘤关系的研究进展