白花蛇舌草中熊果酸的提取纯化工艺研究

摘要

熊果酸是一种五环三萜类物质，具有明显的抗肿瘤、抗氧化、抗炎、保肝、降血脂作用。目前较难合成，一般以从生物质内提取为主。本文研究讨论了从白花蛇舌草中分离提纯熊果酸的工艺。 建立了白花蛇舌草提取物中熊果酸的分析方法。采用薄层层析法进行定性分析，分析条件为：以甲苯：乙酸乙酯：冰醋酸=20：4：0.6为展开剂，硅胶G板为固定相，碘蒸气为显色剂。用反相高效液相色谱法进行定量分析，分析条件为：以甲醇：水：冰醋酸=85：15：0.3为流动相，C18柱为固定相，流速为0.6ml/min，进样量为10μl，检测波长为210nm，柱温为30℃。 采用溶剂法粗提熊果酸。以乙醇为提取溶剂，通过单因素实验及正交实验，获得的最佳提取条件是：95％乙醇溶液在回流温度下提取两次，每次1.5h，液固比为8：1。由提取实验测得实验用白花蛇舌草中含熊果酸3.57×10-3(g/g)。而上述条件下熊果酸的提取率可达95％左右，提取物中熊果酸的含量约为25％。 用溶剂法对提取后的熊果酸进行初步纯化。先用液固比10(v/m)的石油醚对粗提浸膏进行三次脱脂，再用氯仿以1：1的料液比萃取两次。然后用酸碱沉淀法即通过调节提取物醇溶液的pH值来进一步纯化熊果酸，最佳条件为首先将样品的醇溶液用10％的NaOH溶液碱化至pH11左右，加热，搅拌静置，过滤；将滤液用10％的HCl溶液酸化至pH为2，再用同样酸度的水溶液稀释一倍，静置，过滤，再用水洗沉淀至中性，真空干燥。最后所得产品含量可达36％左右，回收率在72.6％左右。 本文还考察了柱层析精制工艺，通过单因素考察获得的最佳层析条件为以80～120目的硅胶为固定相，流动相为氯仿～甲醇体系，梯度洗脱，洗脱速度以0.8BV/h为宜，洗脱时温度控制在25℃。通过柱层析，产品中熊果酸的纯度可由过柱前的36％提高到65％以上。另外还初步摸索了产品的结晶工艺。 最后对通过MTT法考察了本文得到的产品对细胞K562/ADM增殖抑制作用，发现有明显的细胞毒作用。

目录

文摘

英文文摘

前言

第一章文献综述

1.1白花蛇舌草

1.1.1资源

1.1.2化学成分

1.1.3药理作用及临床应用

1.1.4抗癌活性成分的研究

1.1.5展望

1.2熊果酸

1.2.1结构特征

1.2.2熊果酸的理化性质

1.2.3熊果酸的生物活性

1.2.4熊果酸的植物来源

1.2.5熊果酸的提取分离方法

1.2.6熊果酸的分析方法

1.3课题意义

第二章熊果酸的分析方法

2.1薄层层析

2.1.1实验材料及仪器

2.1.2实验方法

2.1.3结果与讨论

2.2 HPLC分析

2.2.1实验材料及仪器

2.2.2色谱分析条件

2.2.3溶液的制备

2.2.4结果与讨论

2.3本章小结

第三章熊果酸的溶剂粗提

3.1仪器与试剂

3.2实验方法

3.3结果与讨论

3.3.1单因素实验

3.3.2交实验

3.4本章小结

第四章熊果酸的初步纯化

4.1实验材料与仪器

4.2石油醚萃取

4.2.1实验方法

4.2.2结果与讨论

4.3溶剂萃取

4.3.1实验方法

4.3.2结果与讨论

4.4沉淀法富集

4.4.1实验方法

4.4.2结果与讨论

4.5本章小结

第五章熊果酸的精制

5.1熊果酸的薄层色谱研究

5.1.1实验仪器及试剂

5.1.2实验步骤

5.1.3实验结果及讨论

5.2柱层析精制熊果酸

5.2.1实验仪器及试剂

5.2.2实验步骤

5.2.3实验结果及讨论

5.2.4结论

5.3静态吸附考察

5.3.1实验仪器及试剂

5.3.2吸附平衡

5.3.3吸附速率

5.4动态吸附

5.4.1试剂及仪器

5.4.2实验方法

5.4.3结果与讨论

5.5结晶实验

5.6本章小结

第六章药理实验

6.1主要生化试剂与仪器

6.1.1主要生化试剂与药品

6.1.2仪器

6.2方法

6.2.1 K562/AD细胞株的培养

6.2.2 MTT法观察白花蛇舌草提取物对细胞K562/ADM增殖抑制的观察

6.3结果与讨论

第七章结论与建议

7.1结论

7.1.1分析方法

7.1.2提取纯化工艺

7.1.3药理检验

7.2建议

参考文献

致 谢