天然产物中抗氧化活性成分的高速逆流色谱分离研究

摘要

复杂天然产物中活性有机物分离分析方法的研究是当代有机分析化学的重要内容，也是药物研发中寻找先导化合物的重要环节。高速逆流色谱作为一种无需固体载体的分离技术，已广泛应用于天然产物中活性成分的分离纯化。因此，开展逆流色谱分离天然产物中活性成分的相关研究有着重要的科学意义和应用价值。围绕这一目标，本论文具体开展了以下工作:
　　1.活性导向的高速逆流色谱技术分离纯化异叶蛇葡萄中的抗氧化成分。首先进行在线活性测试，将异叶蛇葡萄粗品与羟基自由基在线反应，筛选出5个具有较好活性的化合物。选取上述5个化合物为分离目标，采用溶剂系统甲基叔丁基醚/乙腈/水(2/2/3，v/v)及环己烷/甲基叔丁基醚/乙酸乙酯/水(1/4/3/5，v/v)，从100mg的粗品中成功分离出5个成分。经结构鉴定，这5个化合物分别为:金丝桃苷(1)，异槲皮苷(2)，芦丁(3)，山柰酚-3-0-芸香糖苷(4)及槲皮素(5)。活性测试表明上述5个化合物均具有较好清除DPPH和羟基自由基的能力，其IC50值分别为18.2±1.3，17.0±1.4，24.2±1.2，38.1±1.7，9.0±1.2μM。抗氧化剂对羟基自由基的清除率(SRA)为65±5％，68±4％，96±2％，70±4％，98±2％。上述结果显示，使用该策略进行分离，可以大大提高活性化合物的纯化效率，在天然产物的活性成分的分离纯化中具有良好应用前景。
　　2.利用逆流色谱分离得到杭白菊粗提物中的目标活性化合物。粗提物经LC/MS/MS分析及与标准品对照，确认其主要成分为活性化合物芹黄素-5-O-葡萄糖苷和金合欢素-7-O-葡萄糖苷，随后选取甲基叔丁基醚/正丁醇/乙腈/水(1.5/2/1/5，v/v)为溶剂体系进行逆流色谱分离，得到上述两化合物的纯品。实验表明，逆流色谱是一种制备高纯度活性成分的有效手段。
　　此外，论文就高速逆流色谱近些年的方法发展作了简要总结。

目录

摘要

英文摘要

第一章 逆流色谱综述

1．1 逆流色谱简介

1．2 逆流色谱原理

1．3 逆流色谱溶剂系统的选择

1．4 逆流色谱研究发展

1．4．1 传统HSCCC分离方法

1．4．2 梯度洗脱HSCCC技术

1．4．3 多维逆流色谱(Multidimensional CCC，MDCCC)

1．4．4 洗脱-挤出逆流色谱(Elution-Extrusion CCC， EECCC)

1．4．5 重叠洗脱-挤出逆流色谱(Overlapping Elution-Extrusion CCC)

1．4．6 反推逆流色谱技术(Back-Extrusion CCC，BECCC)

1．4．7 pH-区带精制逆流色谱

1．5 本章小结

参考文献

第二章 活性导向的异叶蛇葡萄中抗氧化剂的逆流色谱分离

2．1 引言

2．2 材料和方法

2．2．1 试剂

2．2．2 仪器

2．2．3 粗品准备

2．2．4 测试粗品清除羟基自由基的能力

2．2．5 溶剂系统和样品溶液的准备

2．2．6 高速逆流色谱分离

2．2．7 高效液相色谱检测及化合物鉴定

2．2．8 分离后的化合物活性确认

2．3 结果与讨论

2．3．1 通过高效液相色谱在线测试筛选粗品中抗氧化剂

2．3．2 溶剂系统的选择

2．3．3 结构鉴定

2．3．4 活性确认

2．4 天然产物活性物质分离新策略

2．5 本章小结

参考文献

第三章 应用高速逆流色谱分离杭白菊中活性成分

3．1 引言

3．2 材料和方法

3．2．1 试剂

3．2．2 仪器

3．2．3 粗品准备

3．2．4 粗提物高效液相色谱分析及LC／MS分析

3．2．5 溶剂系统和样品溶液的准备

3．2．6 高速逆流色谱分离

3．2．7 高效液相色谱检测及化合物鉴定

3．3 结果与讨论

3．3．1 粗提物中主要成分的液质分析

3．3．2 溶剂系统的选择

3．3．3 结构鉴定

3．4 本章小结

参考文献

论文总结及今后工作展望

附录：硕士期间发表和待发表的论文

致谢

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