中性粒细胞外陷阱(NETs)杀灭金黄色葡萄球菌及糖皮质激素对其影响的体外研究

摘要

目的:
　　评估中性粒细胞胞外陷阱（NETs）对金黄色葡萄球菌的体外杀灭作用，并探讨糖皮质激素对NETs形成和杀菌效率的影响。
　　方法:
　　从健康志愿者外周血中分离出中性粒细胞，加入一定浓度的金黄色葡萄球菌，免疫荧光染色观察不同作用时间的NETs形成，利用IPP显微镜图像分析软件定量测定NETs形成率。通过细胞松弛素D抑制中性粒细胞的吞噬和脱颗粒，测定NETs的杀菌效率;以松弛素D预处理中性粒细胞后再用DNase破坏NETs结构，检测无NETs作用下细菌负荷量，测定NETs杀菌效率，分析NETs形成率和NETs杀菌率之间的相关性。在此基础上使用三种不同浓度的地塞米松（1，10，100μg/ml）处理中性粒细胞，加入金黄色葡萄球菌，以同样方法测定NETs形成和杀菌效率，分析地塞米松对NETs形成率和NETs杀菌率的影响。
　　结果:
　　体外中性粒细胞在金黄色葡萄球菌的刺激下形成NETs，中性粒细胞在抗感染过程中吞噬作用和NETs同时存在，NETs的形成率与两者作用时间呈正相关，杀菌率在2小时内呈正相关，DNase水解NETs后杀菌率明显下降。NETs的形成和杀菌率均受地塞米松的影响，中高浓度的地塞米松抑制了NETs的形成和杀菌率。
　　结论:
　　金黄色葡萄球菌能诱导中性粒细胞形成NETs，中性粒细胞在抗感染过程中吞噬作用和NETs同时存在，NETs具有优越的抗菌功能。NETs形成率和杀菌率在一定时间内呈正相关;糖皮质激素可能通过抑制NETs的形成从而抑制了中性粒细胞的抗感染作用。

目录

声明

致谢

摘要

缩略词表

前言

1 材料和方法

1．1 材料

1．1．1 实验试剂

1．1．2 实验仪器

1．2 方法

1．2．1 细菌培养

1．2．2 中性粒细胞分离(不连续的密度梯度血浆-Percoll离心法)

1．2．3 金黄色葡萄球菌感染中性粒细胞观察不同作用时间NETs形成率检测

1．2．4 金黄色葡萄球菌感染中性粒细胞观察不同作用时间NETs杀菌率的检测

1．2．5 DNA酶(DNase Ⅰ)对NETs形成率的影响

1．2．6 DNA酶(DNase Ⅰ)对NETs杀菌率的影响

1．2．7 地塞米松对NETs形成率的影响

1．2．8 地塞米松对NETs杀菌率的影响

1．2．9 NETs免疫荧光染色

1．3 NETs的定量方法

1．4 统计分析

2 结果

2．1 Percoll离心法分离中性粒细胞

2．2 中性粒细胞对金黄色葡萄球菌的吞噬作用

2．3 NETs免疫荧光染色

2．4 DNA酶(Dnase Ⅰ)对NETs的作用

2．5 中性粒细胞和金黄色葡萄球菌作用不同时间NETs的形成情况和杀菌率

2．6 地塞米松对NETs形成率的影响

2．7 地塞米松对NETs杀菌率的影响

3 讨论

4 结论

参考文献

综述 中性粒细胞胞外网络(NETs)：中性粒细胞杀伤性武器

作者简历及在学期间所取得的科研成果