声明
第一章 绪论
1.1microRNA在小非编码RNA (ncRNA)中研究的地位
1.1.1 microRNA的生成过程
1.1.2 miRNA两个不同亚类
1.1.3 miRNA在细胞质中的功能
1.1.4 在细胞质中miRNA-RISC的活性
1.2.1 miRNA在植物胁迫反应中的功能作用
1.2.2 miRNA调控植物病毒和细菌的致病相关机制
1.2.3 应对非生物胁迫时miRNA的表现出的作用
1.3.1 miRNA在水稻中的研究现状
1.3.2 本研究选择的miRNA研究现状
1.4突变体创制方法与基因编辑技术
1.5 立体依据及意义
1.6 研究内容
第二章 材料与方法
2.1.1 植物材料
2.1.2 工程菌株
2.2 实验试剂
2.3 实验仪器
2.4 实验方法
2.4.1 水稻CRISPR-Cas12a定向修饰骨架载体构建
2.4.2 crRNA靶位点选择及设计
2.4.3 基因组定向编辑载体构建过程
2.4.4 大肠杆菌DH5α传统热激法转化步骤
2.4.5 菌落PCR
2.4.6 质粒DNA提取及检测验证
2.4.7 农杆菌感受态制备及转化
2.4.8 水稻遗传转化
2.4.9 水稻基因组DNA提取
2.4.10 水稻再生植株转基因阳性检测
2.4.11 水稻基因组向修饰突变体材料 PCR-SSCP检测
2.4.12 水稻基因组向修饰突变体材料 盐胁迫实验
2.4.13 miRNA基于数据库功能预测和靶基因预测
第三章 结果与分析
3.1 水稻目标基因CRISPR-Cas12a定向修饰表达载体构建
3.2 水稻再生植株转基因阳性鉴定
3.3 水稻miRNAs-T0代植株目的基因突变检测
3.3.1 pCHQ21-T0代植株目的基因检测及测序结果
3.3.2 pCHQ22-T0代植株目的基因检测及测序结果
3.3.3 pCHQ23-T0代植株目的基因检测及测序结果
3.3.4 miRNA-T0代植株目的基因检测结果统计
3.4 水稻miRNA突变体T1代植株目的基因检测和基因型分析
3.4.1 水稻pCHQ21-T1代植株目的基因检测
3.4.2 水稻pCHQ22-T1代植株目的基因检测
3.4.3 水稻pCHQ23-T1代植株目的基因检测
3.5 miRNA突变体-T1代植株基因型检测数据统计
3.6 miRNA突变体-T2代植株苗期表型对比
3.7 miRNA突变体-T2代植株盐胁迫实验
3.7.1 水稻pCHQ21突变体-T2代植株盐胁迫实验
3.7.2 水稻pCHQ22突变体-T2代植株盐胁迫实验
3.8 三个水稻miRNA靶基因预测结果
3.8.1 水稻miRNA827靶基因预测结果
3.8.2 水稻miRNA1850靶基因预测结果
3.8.3 水稻miRNA3982靶基因预测结果
第四章 讨论
4.1 CRISPR-Cas12a创制水稻突变体
4.2.1 miRNA827研究现状和参与调控预测
4.2.2 miRNA1850研究现状和参与调控预测
4.2.3 miRNA3982研究现状和参与调控预测
第五章 结论
致谢
参考文献
攻硕期间取得的研究成果
