脑源性神经生长因子在唾液腺腺样囊性癌神经侵袭和转移中作用的相关研究

摘要

目的： 以SACC临床标本和SACC细胞系ACC-2及其肺高转移株ACC-M作为研究肿瘤转移分子机制的模型，旨在通过一系列体外、体内实验观察脑源性神经生长因子(BDNF)与SACC神经侵袭特性的关系以及BDNF对SACC抗失巢凋亡能力、增殖能力、体内转移能力的影响。 方法： 1.以30例SACC标本为研究对象，以5例正常腮腺及3例腺泡细胞癌作为对照，采用免疫组化法对BDNF和TrkB进行检测。以SACC高低转移细胞系ACC-2和ACC-M为研究对象，利用免疫组化、RT-PCR、实时荧光定量PCR和Western印迹检测BDNF和TrkB在其中的表达差异。 2.以唾液腺腺样囊性癌(SACC)高低转移细胞系ACC-Metastasis(ACC-M)和ACC-2为研究对象，利用MTT、悬浮培养、流式细胞仪、软琼脂克隆形成实验观察BDNF对SACC抗失巢凋亡能力、增殖能力和体外侵袭能力的影响。 3.以唾液腺腺样囊性癌(SACC)高低转移细胞系ACC-Metastasis(ACC-M)和ACC-2为研究对象，利用裸鼠建立涎腺腺样囊性癌体内转移模型，观察BDNF在涎腺腺样囊性癌转移过程中的作用。 结果： 1.组织标本免疫组化显示TrkB表达水平在嗜神经现象组显著高于未见嗜神经现象组(P<0.05)，BDNF表达水平与嗜神经现象无关(P>0.05)。实时荧光定量PCR和Western印迹均检测到BDNF和TrkB在ACC-M中的表达高于ACC-2(P<0.01)。 2.ACC-2和ACC-M在体外培养过程中均具有一定的抗失巢凋亡能力，且ACC-M高于ACC-2(P<0.01)。25ng/ml，50ng/ml，100ng/mlBDNF对ACC-2和ACC-M增值均无明显影响(P>0.05)。50ng/ml BDNF可以明显提高ACC-2的抗失巢凋亡能力(P<0.01)和克隆形成(P<0.01)。50ng/ml BDNF可以明显提高ACC-2和ACC-M的体外侵袭能力(P<0.01) 3.ACC-M裸鼠体内转移能力显著高于ACC-2的裸鼠体内转移能力，ACC-2和ACC-M在转移能力上存在差异。实验组(ACC-2+100ng/ml BDNF)与对照组(ACC-2)相比较，虽然在成瘤面积和所占比例上略高，但其差异不具有统计学意义。 结论： 1.TrkB的表达强度与SACC的神经侵袭特性相关。BDNF和TrkB的表达强度与SACC的高转移特性相关。 2.SACC的转移特性与抗失巢凋亡能力相关，适合浓度的BDNF可以提高SACC的抗失巢凋亡能力和体外侵袭能力。BDNF对SACC的增殖无明显影响。 3.单纯提高BDNF浓度(50ng/ml BDNF)对ACC-2在裸鼠体内转移能力没有明显提高。

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文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

前言

第一部分BDNF和TrkB在唾液腺腺样囊性癌中的表达研究

1.1材料和方法

1.2结果

1.3讨论

第二部分 BDNF对唾液腺腺样囊性癌细胞株体外抗失巢凋亡能力及体外侵袭能力的影响

2.1材料方法

2.2结果

2.3讨论

第三部分 BDNF对唾液腺腺样囊性癌细胞株转移的影响

3.1材料方法

3.2结果

3.3讨论

全文总结

参考文献

附录 综述：肿瘤失巢凋亡的研究进展

附录 论著一 BDNF和TrkB在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义

致谢

博士期间发表论文