盐生植物花花柴和盐爪爪液泡膜Na/H反向运输载体的基因表达和抗体制备

摘要

新疆盐渍土面积广阔，盐渍土壤孕育的盐生植物对于维持新疆盐渍土-荒漠-绿洲复合生态系统平衡，促进区域经济发展起着重要的作用。花花柴(Kareliniacaspica)和盐爪爪(Kalidium．foliatum)是新疆盐生植物的代表，花花柴为菊科花花柴属，盐爪爪为多年生的藜科灌木，两者广泛分布于我国西北各省盐生草甸和弃耕盐地上，在新疆多生长于极端盐碱的沙漠中，对硫酸盐，氯化物和苏打等盐类有较强的忍耐力，具有重要的生态价值，也是经济盐生植物。 盐分会对植物产生伤害。植物吸收水分的同时吸收了过多的盐离子，特别是Na<'+>对植物具有毒害作用。盐生植物之所以能在高盐环境中生存，是因为它们能有效地将吸收过多的Na<'+>区隔化至液泡内，从而防止基质中过多盐离子的毒害作用。在这个机制中，液泡膜Na<'+>/H<'+>反向转运载体(简称NHX)蛋白起着较重要的作用。随着人们对盐生植物耐盐机制不断深入的研究，很多植物的NHX基因相继被克隆。我们实验室在研究花花柴和盐爪爪的耐盐机制时，也克隆了Kcnhxl和Kfnhxl基因。 为了对花花柴和盐爪爪Na<'+>/H<'+>反向运输载体进行定位和定量，本文研究了这两种盐生植物花花柴和盐爪爪Na<'+>/H<'+>反向运输载体的的表达情况并获得KcNHXl和KfNHXl的抗体，本文将KcNHXlC端的94个氨基酸以及KfNHXlC端的157个氨基酸的编码序列克隆到原核表达载体pMAL-p2x上，并将Kcnhxl和Kfnhxl全编码序列克隆到真核表达载体pcDNA3.1上。在大肠杆菌(E. coli)表达系统中将pMAL-p2x-Kcnhxl—c285和pMAL-p2x-Kfnhxl-c471．表达，并纯化了融合蛋白MBP-KcNHXl-C94和MBP-KfNHXl-C157；用尾静脉大容量快速注射法(Hydrodynamics-based transfection method，HD法)将pcDNA3.1- Kcnhxl和pcDNA3.1- Kfnhxl导入小鼠的肝细胞让其表达。分别用pcDNA3.1- Kcnhxl和pcDNA3.1- Kfnhl质粒免疫小鼠，激发免疫反应后，用MBP-KcNHXl-C94和MBP-KfNHXl-C157加强免疫，分别制得效价高，特异性好的抗KcNHXl和KfNHX1抗体，为以后研究花花柴和盐爪爪的耐盐机制及转基因植物中的耐盐基因的表达提供了可用的抗血清，同时建立了耐盐植物的功能基因制备抗体和检测表达蛋白的简便方法。

目录

论文说明：英文缩略语

声明

摘要

主要实验仪器

第一部分综述

第二部分实验及实验结果

第一章Kcnhx1和Kfnhx1基因原核及真核表达载体的构建和表达

1材料及主要试剂

2实验方法

3实验结果

4讨论

第二章KcNHX1和KfNHX1抗体的制备

1材料及主要试剂

2实验方法

3实验结果

4讨论

总结

参考文献

致 谢

个人简历