雌激素对大鼠脂肪干细胞增殖及成平滑肌细胞分化影响的研究

摘要

目的:探讨雌激素（17β-雌二醇）对大鼠脂肪干细胞（ASCs）的体外增殖以及成平滑肌细胞分化的影响。
　　方法:采用I型胶原酶消化法从雌性SD大鼠腹股沟区脂肪组织中分离培养脂肪干细胞，传至第3代细胞，利用流式细胞术鉴定细胞表面抗原（CD90、CD73、CD45），进行成脂、成骨诱导分化鉴定细胞多向分化能力。设置含不同浓度雌激素（10-7、10-8、10-9、10-10、10-11、0 mol/L）的DMEM培养基组，分别用于脂肪干细胞的体外增殖，采用MTS法绘制各雌激素组的细胞生长曲线，评价雌激素对脂肪干细胞体外增殖的影响及不同浓度组间的差异，以确定雌激素最适作用浓度。分化实验中，分别使用添加和不添加雌激素的成平滑肌诱导培养基（SMIM）诱导脂肪干细胞成平滑肌分化，在诱导分化2周后和4周后，采用免疫荧光、实时定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）、蛋白质免疫印迹（Western Blot）等方法检测平滑肌特异性标记物（α-SMA、SM22、Calponin、MHC）及雌激素受体（ERα）的表达情况。
　　结果:增殖实验结果：与无激素组相比，各浓度雌激素均不同程度地促进脂肪干细胞增殖，以10-9mol/L雌激素组最为明显。分化实验结果：诱导2周后，雌激素组细胞的平滑肌分化早期标志物（α-SMA）、分化中期标志物（SM22，Calponin）、分化晚期标志物（MHC）表达均高于无激素组（p＜0.05）；诱导4周后，两组细胞的平滑肌分化早期标志物、中期标志物表达情况无差异，而晚期标志物的表达雌激素组高于无激素组（p＜0.05）；同时，雌激素组细胞在2周、4周时均可检测到ERα表达量升高，且第4周表达量高于第2周（p＜0.05），无激素组则无这种现象。
　　结论:1、雌激素促进脂肪干细胞的体外增殖，并与浓度相关，最适作用浓度为10-9mol/L。2、雌激素可促进脂肪干细胞体外诱导成平滑肌分化过程，加快脂肪干细胞诱导来源平滑肌细胞分化成熟，雌激素对脂肪干细胞成平滑肌分化的促进作用与ERα的激活有关。

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中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

1．实验材料

2．实验方法

3．统计学分析

实验结果

1．脂肪干细胞生物学特性

2．膀胱平滑肌细胞分离培养

3．不同浓度雌激素作用下脂肪干细胞生长曲线

4．雌激素对脂肪干细胞成平滑肌分化的影响

讨论

结论

参考文献

附 录：主要缩略词表

综述: 雌激素对脂肪干细胞增殖与分化的影响

致谢