T细胞免疫球蛋白粘蛋白3在骨肉瘤中的表达及作用研究

摘要

本文分为以下几个部分:
　　第一部分:TIM-3在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义
　　目的：检测TIM-3在骨肉瘤组织中的表达水平，并分析其表达水平与患者临床预后的相关性。
　　方法：应用免疫组化技术检测38例骨肉瘤肿瘤组织及癌旁组织中TIM-3表达水平，并应用统计学模型处理数据，分析其表达水平与患者临床预后的相关性。
　　结果：免疫组化结果显示TIM-3在骨肉瘤组织中呈现不同程度的高表达，在癌旁组织中呈现低表达。TIM-3的阳性表达水平与骨肉瘤患者性别、年龄、肿瘤病理分型、病变部位、Enneking分期等无明显相关性。Kaplan-Meier生存分析显示，TIM-3表达水平高的患者临床预后比表达水平低的患者差。
　　结论：骨肉瘤肿瘤组织中TIM-3表达水平较高，癌旁组织中表达水平较低，TIM-3表达水平的高低与骨肉瘤患者临床预后呈负相关，提示TIM-3在骨肉瘤发生发展中可能起到重要作用。
　　第二部分:靶向抑制TIM-3对骨肉瘤细胞生物学行为的影响
　　目的：研究靶向抑制TIM-3对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭等生物学行为的影响，为TIM-3靶向治疗研究提供理论基础。
　　方法：应用MTT、克隆形成实验检测靶向抑制TIM-3对骨肉瘤细胞MG63、U-2OS增殖的影响；应用划痕实验、Transwell实验检测靶向抑制TIM-3对骨肉瘤细胞迁移、侵袭的影响；应用流式细胞仪Annexin V-FITC染色法检测靶向抑制TIM-3对骨肉瘤细胞凋亡的影响；应用Western-blot技术检测靶向抑制TIM-3对骨肉瘤细胞侵袭相关蛋白的表达的影响。
　　结果：MTT结果提示靶向抑制TIM-3能明显抑制骨肉瘤MG63、U-2OS细胞增殖和克隆形成；划痕实验、Transwell实验均提示靶向抑制TIM-3能显著抑制MG63、U-2OS迁移和侵袭；流式细胞仪Annexin V-FITC染色法结果提示靶向抑制TIM-3能促进MG63、U-2OS凋亡；Western-blot结果提示靶向抑制TIM-3能显著降低侵袭相关蛋白的表达。
　　结论：靶向抑制TIM-3能抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭，促进骨肉瘤细胞凋亡。
　　第三部分:靶向抑制TIM-3对骨肉瘤荷瘤裸鼠的抗肿瘤作用
　　目的：研究靶向抑制TIM-3对骨肉瘤细胞荷瘤裸鼠皮下移植瘤生长的影响。
　　方法：将24只裸鼠随机分成实验组（TIM-3siRNA）和对照组，将人骨肉瘤细胞接种于右背部皮下建立荷瘤裸鼠模型，检测各组裸鼠体重变化，绘制肿瘤体积生长曲线，待第一只裸鼠正常死亡时处死所有裸鼠，检测肿瘤的重量和体积。应用免疫组化技术检测两组肿瘤组织中PCNA和HMGB1的表达水平。
　　结果：TIM-3siRNA实验组较对照组相比，U-2OS荷瘤裸鼠移植瘤肿瘤重量、体积显著降低，抑瘤率显著增高。TIM-3siRNA实验组肿瘤中PCNA和HMGB1表达水平均显著低于对照组。
　　结论：靶向抑制TIM-3能抑制骨肉瘤细胞荷瘤裸鼠皮下移植瘤生长和侵袭能力。

目录

声明

英文缩略词表

总 前 言

前言

第一部分 TIM-3在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义

材料与方法

结果

讨论

参考文献

附图表：

第二部分 靶向抑制TIM-3对骨肉瘤细胞生物学行为的影响

材料与方法

结果

讨论

参考文献

附图：

第三部分 靶向抑制TIM-3对骨肉瘤荷瘤裸鼠的抗肿瘤作用

材料与方法

结果

讨论

参考文献

全文小结

结论

本研究主要创新点：

本研究不足之处：

综述:T细胞免疫球蛋白粘蛋白家族Tim-3在肿瘤免疫中的研究进展

附录1 攻读博士学位期间完成的学术论文

附录2 博士期间完成的课题及获得的奖励

致谢