Claudin-1通过激活ERK1/2蛋白促进肺动脉平滑肌细胞的增殖

摘要

目的：
　　肺小血管重构是肺动脉高压（Pulmonary arterial hypertension）发生发展的重要病理基础。肺动脉平滑肌细胞的异常增殖是参与肺小血管重构的主要机制之一。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是参与肺动脉高压发展的一种重要的促炎细胞因子。TNF-α能促进多种细胞中Claudin-1(CLDN1)的表达，而CLDN1参与细胞的增殖调控。因此，我们提出假设：CLDN1可能通过调控肺动脉平滑肌细胞的增殖参与肺小血管重构的发生及发展，从而造成肺动脉高压的不可逆改变。
　　方法：
　　使用野百合碱（monocrotaline，MCT）腹腔注射建立肺动脉高压大鼠模型。通过免疫印迹（Western blot）及免疫荧光染色的方法检测肺动脉高压大鼠及患者肺组织中CLDN1的表达。NF-κB抑制剂BAY11-7082预处理人肺动脉平滑肌细胞（human pulmonary artery smooth muscle cells，HPASMCs），TNF-α刺激HPASMCs，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及Western-blot分别检测CLDN1mRNA及蛋白表达水平。通过腺病毒感染上调CLDN1及小干扰RNA（siRNA）转染下调CLDN1表达以探讨CLDN1在HPASMCs增殖中的作用。同时应用CCK-8测定及BrdU掺入法两种方法检测细胞增殖率。Western blot检测ERK1/2磷酸化。
　　结果：
　　肺组织石蜡切片免疫荧光染色结果显示肺动脉高压大鼠及患者肺组织中肺动脉平滑肌CLDN1表达较正常对照组明显增加；TNF-α促进原代人肺动脉平滑肌细胞中CLDN1的表达；NF-κB抑制剂BAY11-7082抑制TNF-α所诱导的CLDN1升高。CLDN1过表达促进人肺动脉平滑肌细胞的增殖，下调CLDN1则抑制TNF-α所诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖。而且进一步的机制研究提示CLDN1通过ERK1/2激活促进人肺动脉平滑肌细胞增殖。
　　结论：
　　CLDN1通过调控肺动脉平滑肌细胞增殖在肺小血管重塑及肺动脉高压中发挥重要的作用，可能成为潜在的治疗靶点。

目录

声明

前言

参考文献

第一部分 构建肺动脉高压大鼠模型

引言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 Claudin-1通过激活ERK1/2促进人肺动脉平滑肌细胞的增殖

引言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

全文小结

综述：Claudins在呼吸系统疾病中的作用

附录中英文缩略对照表

致谢