康莱特注射液联合放疗对Lewis肺癌小鼠MDSC、HIF-1α表达的影响

摘要

目的:手术、放射治疗、化学治疗等传统恶性肿瘤治疗方法难以解决恶性肿瘤的复发转移问题。肿瘤微环境的改变是肿瘤复发转移的关键。中医药能够个体化、多层次、多靶点控制肿瘤生长、对抗转移、减少复发，与放化疗结合，能够增效减毒。临床实践中发现放疗联合康莱特注射液(Kanglaite，KLT)具有增效减毒作用。关于KLT对肿瘤微环境的影响研究报道不多。本研究通过检测KLT对Lewis肺癌小鼠放疗敏感性的影响，进一步探讨KLT对髓系抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells，MDSC)的数目及缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）表达的影响，进一步分析KLT的作用机制。
　　方法:
　　1、体外培养Lewis肺癌细胞，取传至3-4代生长好的细胞接种于小鼠左腋皮下，建立Lewis肺癌移植瘤模型。观察记录小鼠的一般情况，如体重、进食、活动、毛发等情况。待肿瘤最长径为0.8-1cm时，挑选肿瘤大小较均一的荷瘤小鼠24只，随机分为对照组(control)、康莱特组（KLT）、放疗组(RT)及康莱特联合放疗组（KLT+RT）4组，每组6只，生理盐水(NS)处理组作为对照组，分别用KLT、NS+RT、KLT+RT处理;选取6只大小较均一的健康小鼠作为健康对照组(NC)。
　　2、各组小鼠干预处理结束后，脱颈方法处死小鼠，称取小鼠的体重，完整剥离小鼠瘤组织及脾脏、肺脏，并测量瘤体大小。
　　3、采用实时荧光定量PCR(real-time PCR，RT-PCR)技术检测各组小鼠瘤体和肺组织中HIF-1α基因表达。
　　4、采用流式细胞技术(flow cytometry，FCM)检测各组小鼠脾脏、瘤体中MDSC的数目及比例。
　　5、采用SPSS17.0软件包建立数据库，将相关资料结果录入数据库，进行统计分析。计数资料以率(％)表示，计量资料用(x)±s表示。多组样本间均数比较应用单因素方差分析，组间多重比较应用LSD检验，各检验均以P＜0.05为差异有统计学意义。
　　结果:
　　1、各组小鼠一般情况:小鼠皮下接种Lewis肺癌细胞后约1周建模成功，约14天肿瘤生长最长径为1.5-2.0cm。荷瘤小鼠进食、活动、毛发等一般情况逐渐变差，对照组小鼠最明显。
　　2、各组对荷瘤小鼠的抑瘤效应:对照组、KLT组、RT组、KLT+RT组平均肿瘤体积分别为（6.78±0.90）cm3、（6.52±0.92）cm3、（0.87±0.53）cm3、（0.08±0.30）cm3，三个治疗组的肿瘤体积均低于对照组，与对照组相比，KLT组小鼠肿瘤体积缩小，但无统计学意义（P＞0.05），RT组、KLT+RT组小鼠肿瘤体积缩小，均有统计学意义（P＜0.05）;与KLT组相比，RT组、KLT+RT组肿瘤体积缩小更明显，有统计学意义(P＜0.05);与RT组相比，KLT+RT组肿瘤体积缩小更明显，有统计学意义(P＜0.05)(Table2)
　　3、各组小鼠肿瘤组织、肺组织中HIF-1α的基因表达的比较:健康对照小鼠肺组织中不表达HIF-1α基因，Lewis肺癌小鼠瘤组织、肺组织中均表达HIF-1α基因，而肿瘤组织中HIF-1α基因的表达明显高于肺组织，差异有统计学意义(P＜0.05);实时荧光定量分析显示，与NS组相比，KLT组小鼠瘤组织中HIF-1α基因表达降低，差异有统计学意义（P＜0.05）;RT组HIF-1α基因表达水平增高，差异有统计学意义(P＜0.05);KLT+RT组表达亦较低，有统计学意义(P＜0.05);与KLT+RT组相比，KLT组HIF-1α基因表达更低，差异有统计学意义(P＜0.05)(Fig.3-8，Table3)。
　　4、各组小鼠肿瘤组织、脾脏组织中MDSC百分比的比较:健康对照小鼠脾脏中几乎无MDSC表达，而Lewis肺癌小鼠脾脏、瘤组织中均存在MDSC表达，且瘤组织中MDSC表达较脾脏中高;流式分析结果显示，与NS组相比，KLT组小鼠脾脏、瘤组织中MDSC百分比显著较低，差异有统计学意义(P＜0.05)，RT组脾脏及瘤组织中MDSC百分比略升高，但差异无统计学意义(P＞0.05);KLT+RT组脾脏、瘤组织中MDSC百分比降低，有统计学意义(P＜0.05);与KLT+RT组相比，KLT组脾脏、瘤组织中MDSC百分比降低更显著，差异有统计学意义（P＜0.05）(Fig.9-17，Table4)。
　　结论:
　　1、KLT可抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤生长、增强小鼠免疫功能、改善缺氧状态，其机制可能与抑制MDSC、HIF-1αmRNA表达有关。
　　2、康莱特联合放疗具有增效减毒的作用，其机制可能是康莱特能够改善由放疗引起的肿瘤缺氧及免疫抑制微环境。

目录

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结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 中医药对非小细胞肺癌肿瘤微环境调控的研究概述

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