遹肺饮及其拆方对急性肺损伤后肺纤维化大鼠模型Smad2/3表达影响研究

摘要

目的:基于急性肺损伤后肺纤维化临床和实验研究，结合“肺气主降，肺体喜润”的生理特性，提出该病以肺之气阴两虚为本，血瘀为标的观点。通过实验观察遹肺饮及其拆方对急性肺损伤后肺纤维化大鼠模型Smad2/3表达的影响，依据“以方测证”理论，揭示及完善急性肺损伤后肺纤维化的病机变化，为制定急性肺损伤后肺纤维化规范的中医辨证分型标准、疗效评定体系准确量化及选方用药标准提供建议，以便客观地评定效果。
　　方法:实验采用博莱霉素-A5(BLM-A5)气管滴注法诱发急性肺损伤(ALI)后特发性肺纤维化(IPF) SD大鼠模型。108只大鼠随机分为对照组、模型组、补气通络组、养阴通络组、祛瘀通络组、遹肺饮组。对照组及模型组均灌服生理盐水10ml/kg，补气通络组灌服补气通络方混悬液，5.2 g/kg体重;养阴通络组灌服养阴通络方混悬液，5.1g/kg体重;祛瘀通络组灌服祛瘀通络方混悬液，5.3 g/kg体重;遹肺饮组灌服遹肺饮方混悬液12.4 g/kg体重;各组均每日1次灌胃。通过每日观察大鼠的体重、饮食情况、精神状态、反应情况、外观表征和粪便情况等进行观测，确定急性肺损伤后肺纤维化大鼠模型建立成功。造模后分别在第7天、第14天、第28天三个时间段将6组大鼠各随机抓取6只进行麻醉，股动脉取血;右下肺组织置于4％中性甲醛固定，做石蜡切片，行HE与Masson染色、免疫组化染色;剩余组织液氮速冻，-70℃保存备用，进行Western-blot。
　　结果:
　　1.HE染色结果显示:空白对照组肺组织结构清晰，肺泡腔透亮，肺泡壁未见增厚，肺泡上皮细胞结构完整，肺间质未见胶原沉积。模型组随着时间的延长，其肺泡炎和肺泡纤维化程度明显升高，7天时部分肺泡和毛细血管狭窄甚闭合，致肺组织实性改变，肺泡腔可见大量活化巨噬细胞，中性粒细胞、淋巴细胞少见，肺间质内则出现大量的巨噬细胞及淋巴细胞炎性浸润;14天时肺泡炎持续，炎性细胞浸润亦较明显，部分肺泡结构消失，成纤维细胞增多并可见纤维组织增生，少量胶原沉积;28天时肺泡结构萎陷，成纤维细胞大量增生，纤维组织占据肺泡间隔及部分肺泡腔呈条索样瘢痕改变，斑片状分布。
　　2.Masson染色结果显示:空白对照组在气管及血管壁周围可见少量蓝色的胶原纤维沉积。模型组第7天时肺泡间隔及间质内有成纤维细胞，多集中在血管、小及细小支气管周围，并可见少量蓝色胶原纤维沉积;第14天时肺泡间隔明显增宽，肺血管、气道壁、肺泡间隔及间质内胶原纤维沉积明显增加;第28天时肺间质沉积大片状或条索状的胶原纤维，肺泡融合及实变，典型的肺纤维化改变。
　　3.免疫组化及Western-blot结果显示:肺组织中Smad2/3和TGF-β在第14和28天均持续高表达，且第14天表达最高。
　　4.对急性肺损伤后肺纤维化模型大鼠给予药物干预后，补气通络组、养阴通络组、祛瘀通络组、遹肺饮组大鼠仍存在肺纤维化病理形态学的逐步进展性改变，但程度明显轻于模型组。肺组织中Smad2/3和TGF-β1表达的趋势与模型组类似，但其含量均高于空白对照组而低于模型组(P＜0.05)。
　　结论:
　　1.药物干预后，补气通络组、养阴通络组、祛瘀通络组、遹肺饮组大鼠肺组织中Smad2/3和TGF-β1表达水平均降低于模型组，说明药物对急性肺损伤后肺纤维化的治疗作用机制可能与抑制Smad2/3和TGF-β1表达有关。
　　2.拆方治疗效果不及遹肺饮方治疗效果好，通过“以方测证”原理，说明急性肺损伤后肺纤维化的基本病机为气阴两虚兼有血络瘀阻不通。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料

2 动物分组设计与造模方法

3 观察指标

4 实验方法

5 数据处理

结果

1 各组大鼠一般状态观察

2 病理组织学观察

附图

附表

讨论

1 概念及病名归属

2 病因病机及“以方测证”

3 急性肺损伤后肺纤维化大鼠模型的建立

4 遹肺饮的立法依据和组方特点

5 通肺饮及其拆方可有效调节急性肺损伤后肺纤维化大鼠肺组织中TGF-β1、Smad2／3的含量表达的影响

6 结论

7 评价及存在问题

参考文献

综述 肺纤维化中医药研究新进展

致谢

个人简历