肾上腺髓质素经由ERK1/2信号促进人786-0肾癌裸鼠移植瘤生长的调控机制

摘要

目的:肾癌是常见的泌尿系统恶性肿瘤，在我国其发病率每年以6.5％的速度增长，占肾恶性肿瘤的80％-90％，病死率占泌尿系统相关肿瘤的第一位。肾上腺髓质素(adrenomedullin，ADM)最早先是从人肾上腺嗜铬细胞瘤发现并分离出来的一类肽类物质，研究表明其在多种实体瘤中高表达，与肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移关系密切。因此本研究拟通过体内构建裸鼠移植瘤模型并予以ADM诱导，观察其对肿瘤生长的调控作用及其机制。探讨肾上腺髓质素(ADM)经由细胞外信号调节蛋白激酶(extraeeluarSigna regulatedkinase，ERK1/2)信号调控人786-0肾癌裸鼠肿瘤生长的作用及其机制。
　　方法:建立裸鼠人786-0肾癌移植瘤模型，实验分为对照组、ADM诱导组、ADM22-52干预组和PD98059干预组。记录成瘤率，通过测量皮下移植瘤体积记录肿瘤生长情况，HE染色观察病理形态，免疫组织化学染色法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、p-ERK1/2和血管内皮细胞生长因子(VEGF-A)的表达，免疫印迹法检测ADM受体、p-ERK1/2和血管内皮细胞生长因子(VEGF-A)蛋白的表达水平。
　　结果:成功建立人786-0肾癌裸鼠移植肿瘤模型，接种3天可见接种部位有瘤结节出现。本组裸鼠成瘤35只，死亡1只，成瘤率达到87.5％(35/40)，接种两周后取32只纳入实验，按荷瘤小鼠肿瘤体积大小随机分为4组:对照组、ADM诱导组、ADM22-52干预组和PD98059干预组，四组肿瘤体积无差异(P＞0.05)。
　　HE染色镜下可见移植瘤呈典型的肾透明细胞癌浸润性腺癌的特征。与空白对照组和ADM组相比，ADM22-52、PD98059组移植瘤组织出现局部大片坏死区，坏死区细胞崩解，细胞结构消失。
　　免疫组织化学染色结果显示ADM诱导组PCNA、p-ERK和VEGF-A染色分数显著高于对照组，分别为对照组的1.61倍、1.35倍和1.43倍。PCNA在ADM22-52干预组和PD98059干预组下降，分别是ADM诱导组的8.89％和35.56％; p-ERK1/2在ADM22-52干预组和PD98059干预组下降，其染色分数分别是ADM诱导组的8.00％和36.00％; VEGF-A在ADM22-52干预组和PD98059干预组下降，是ADM诱导组的5.66％和35.85％，差异均具有统计学意义(P＜0.05)。
　　免疫印迹结果显示ADM受体ADM诱导组中是对照组的1.31倍，而ADM22-52预处理，能够显著下调ADM受体的表达，是ADM诱导组的22.30％（均P＜0.05）。p-ERK1/2和VEGF-A蛋白水平在ADM诱导组分别为对照组的1.41倍和1.45倍（均P＜0.05），而予以ADM22-52和PD98059预处理，p-ERK1/2蛋白水平分别是ADM诱导组的49.98％和30.84％（均P＞0.05），VEGF-A蛋白水平是ADM诱导组的18.58％和42.10％，(均P＜0.05)。
　　结论:ADM作为一种新型血管活性肽，肾癌细胞是其作用的重要靶细胞之一，ADM通过自分泌和或旁分泌的途径，发挥调控肿瘤细胞有丝分裂和肿瘤新生血管生成、抑制肿瘤细胞凋亡等多方面作用，从而促进肿瘤的发生、发展，通过阻断ADM受体及其下游的ERK1/2信号，可部分或全部阻断ADM对肿瘤的作，因此ADM有望成为潜在的肾癌药物治疗靶点，检测ADM的表达水平亦能够为研究肾细胞癌侵袭转移、预后判断以及分子生物学分期提供一个分子生物学指标，并为肾细胞癌的综合治疗、尤其是基因靶向治疗提供理论依据。

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附表

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结论

参考文献

综述 肾上腺髓质素及其受体与肾癌的研究进展

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