银杏叶提取物对心梗后PIIINP和心肌病理改变的影响

摘要

目的：心血管疾病的发病率和死亡率居世界首位，而其中心肌梗死是心血管疾病中最危急的一种。令人欣喜的是，国内外治疗急性心肌梗死的手段越来越先进，高科技手段让全球众多患者重获新生。但心肌梗死后存活的患者会逐渐出现心肌纤维化，主要病理改变为心脏成纤维细胞增生、心肌细胞肥大、胶原合成异常及过度沉积，可导致心室收缩舒张功能降低、心律失常、心脏运动协调性减低、心力衰竭甚至心源性猝死。目前对于心肌梗死后心肌纤维化患者的治疗、生活质量的提高等方面缺少有效的措施。因此，研究心肌梗死后心肌纤维化的机制和防治，对于提高患者的生存率及预后有着重要的意义。
　　银杏叶提取物(GBE)是以银杏叶为原料，通过加工提取得到的有效成分，主要为黄酮类化合物和萜类内酯，此外还有少量有机酸和烷基酚等。研究发现GBE有清除自由基、抗氧化、改善血液流变学、抗血小板聚集和防治动脉粥样硬化等作用。此外，研究发现GBE可促进大鼠肝纤维化逆转，使肝组织中α平滑肌肌动蛋白、转化生长因子-β和I型胶原降低，肝功能改善。同时，GBE能改善肺间质纤维化患者的临床症状、调节肺功能、降低肿瘤坏死因子的表达，表明GBE对肺间质纤维化可能有治疗作用。该研究室初步发现GBE可明显抑制醛固酮诱导的心脏成纤维细胞的增殖和转化，提示GBE有可能改善心肌纤维化。但在心肌梗死后心肌纤维化动物模型GBE是否有防治作用，尚有待于进一步研究。本实验采用目前国际上标准的GBE，即按德国专利生产的金纳多(EGb761)，大量实验表明EGb761有毒副作用低和安全剂量宽的优点。
　　心肌纤维化时心肌组织中的胶原增生，心肌胶原的主要成分是Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原。实验表明，Ⅲ型前胶原氨基端肽(PIIINP)水平与心肌纤维化程度有关。此外，研究显示PIIINP有非常好的耐贮性和稳定性、较低的个体差异，且PIIINP的变化比其他胶原生物标志物更明显。
　　因此，本实验在结扎冠状动脉左前降支复制的大鼠心肌梗死后心肌纤维化模型中应用不同剂量的GBE，观察血中PIIINP的变化和HE染色反映的心肌组织病理改变，以探讨GBE对心肌梗死后心肌纤维化的作用，为临床上心肌梗死后心肌纤维化的防治提供理论和实验依据，促进抗心肌纤维化中药的发展。
　　方法：健康雄性Sprague Dawley大鼠，体重260±20 g，来自于河北医科大学动物中心，随机分为以下5组：
　　1)假手术组(n=5)：在冠状动脉左前降支的相同部位穿线，但不结扎，其余与模型组相同。
　　2)模型组(n=8)：结扎冠状动脉左前降支，并于术后给予生理盐水。
　　3)模型+EGb761(25 mg/kg)组(n=5)：结扎冠状动脉左前降支，并于术后给予4周EGb76125 mg/kg。
　　4)模型+EGb761(50 mg/kg)组(n=5)：结扎冠状动脉左前降支，并于术后给予4周EGb76150 mg/kg。
　　5)模型+EGb761(100 mg/kg)组(n=5)：结扎冠状动脉左前降支，并于术后给予4周EGb761100 mg/kg。
　　若有动物术中或术后死亡，即另加动物补齐。模型组3只大鼠术后4周取材，2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色评价模型成功情况。各组5只大鼠术后4周取材，放射免疫分析血中PIIINP的变化，并且HE染色观察心肌梗死后心肌组织病理改变。
　　结果：
　　1.大体心脏外形和TTC染色结果：心肌梗死后心肌纤维化模型术后4周处死大鼠，取出心脏观察大体外形的变化，可见模型组心脏体积增大，左心室前壁大片心肌颜色变苍白，与周围正常心肌组织间形成明显的界线。缺血区室壁肌肉基本被纤维组织所代替。TTC染色结果显示，模型大鼠左室壁能观察到明显的灰白色区域(即心肌梗死后心肌纤维化区域)，而右室为红色区域(即心肌非梗死区)。表明本课题中结扎大鼠冠脉左前降支能成功复制心肌梗死后心肌纤维化模型。
　　2.心肌组织HE染色结果：HE染色显示，假手术组大鼠的心肌纤维排列规则，无炎性细胞浸润。心肌梗死后心肌纤维化模型组大鼠的梗死心肌被大量结构紊乱的纤维组织替代，并有大量炎性细胞浸润。提示本实验中心肌梗死后心肌纤维化动物模型建立成功。而在模型+EGb761组，给予大鼠三个不同剂量的GBE治疗后，心肌组织病理改变明显减轻，并且GBE剂量越大，存活的心肌细胞越多，而胶原纤维和炎症细胞越少。表明GBE可改善心肌梗死后心肌纤维化大鼠的心肌组织病理改变。
　　3.放射免疫分析血中PIIINP含量：放免结果显示，假手术组大鼠血中PIIINP含量较低，而心肌梗死后心肌纤维化模型组大鼠血中PIIINP含量明显增高，表明模型组大鼠心肌纤维化的血清标志物水平增高。在模型+EGb761组，给予三个不同剂量的GBE治疗后，大鼠血中PIIINP含量明显降低。提示GBE可减轻大鼠心肌梗死后的心肌纤维化。
　　结论：大鼠结扎冠状动脉左前降支可造成明显的心肌梗死后心肌纤维化，而给予GBE可显著减轻大鼠心肌组织的病理改变。心肌梗死后心肌纤维化大鼠的纤维化血清标志物PIIINP水平明显增高，而GBE可明显降低PIIINP含量。

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前言

材料与方法

1 主要实验仪器和试剂

2 实验动物分组及方法

3 统计学处理

结果

1 大体心脏外形和TTC染色

2 心肌组织HE染色

3 放射免疫分析血中PIIINP含量

附图

讨论

结论

参考文献

综述:银杏叶提取物对纤维化防治作用的研究进展

致谢

个人简历

一、一般情况

二、个人经历

三、发表论文

四、承担或主研课题情况