胆囊癌中吲哚胺2，3-双加氧酶的表达和调节性T细胞的浸润及其临床意义

摘要

背景与目的： 胆囊癌是胆道系统常见的恶性肿瘤，生物学恶性程度高，早期即可出现局部浸润转移和淋巴结转移，临床治疗效果差。研究表明肿瘤免疫逃逸在恶性肿瘤进展或转移中起重要作用，它可以使肿瘤逃避免疫系统的监控，一定程度上决定了肿瘤的浸袭和转移能力，从而影响临床治疗效果。吲哚胺2，3-双加氧酶(IDO)和调节性T细胞(RegulatoryTCells，Tregs)在肿瘤免疫耐受中的作用是近年来肿瘤研究领域的热点，研究表明在乳腺癌、卵巢癌、直肠癌等肿瘤组织中存在IDO的高表达及局部Tregs浸润数量增多，并且与临床预后负相关。进一步研究显示，以IDO和Tregs为靶点的免疫治疗在体外实验中已取得了一些阳性结果，提示IDO和Tregs有可能成为潜在的生物治疗靶点。目前未见有关胆囊癌中IDO表达及Tregs浸润的相关文献报道。 本研究旨在探讨在胆囊癌组织中IDO的表达以及Tregs浸润情况，并分析两者与临床病理特征和预后的关系，初步阐明IDO表达、Tregs水平在胆囊癌中的临床意义。 病例和方法： 收集52例于1990年1月至2003年12月在中山大学附属肿瘤医院及中山大学附属第三医院行根治性或姑息性胆囊癌切除术的胆囊癌标本。包括标准胆囊癌根治性切除术35例(67.3％)，扩大胆囊癌根治切除术4例(7.7％)，姑息性胆囊癌切除术13例(25％)，13例未发生肿瘤转移的肝十二指肠韧带内淋巴结。随访观察时间至2008年12月31日，以5年累计生存率作为观察预后的指标。同时收集研究对象的性别、年龄、术前CA19-9水平、术前有无黄疸、有无胆囊结石、肿瘤大小、癌细胞分化程度、肿瘤分期等一共8项临床病理特征的相关资料，取15例在中山大学第三附属医院因慢性结石性胆囊炎行胆囊切除术的标本作为对照研究组。 采用免疫组化方法检测胆囊癌肿瘤组织、肝十二指肠韧带内淋巴结以及慢性结石性胆囊炎组织中IDO、FoxP3的表达情况。 应用SPSS16.0forWindows统计软件进行分析，计量资料用均数±标准差表示，计量资料的比较用t检验，Cox回归模型分析IDO、Tregs与预后的关系，Log—rank法检验单因素对预后的影响，双侧P<0.05认为差异有统计学意义。 结果： 1、胆囊癌、慢性胆囊炎组织中IDO的表达情况IDO为胞浆着色，胞浆呈现棕黄色，在癌巢中聚集分布，阳性细胞主要为肿瘤细胞，其中IDO强表达者(++～+++)19例(36.5％)，缺失或弱表达者(—～+)33例(63.5％)，在慢性胆囊样标本中未见IDO阳性细胞。 2、胆囊癌、慢性胆囊炎组织中FoxP3的表达情况FoxP3阳性染色为棕黄色，位于细胞核，阳性细胞主要位于癌周间质中，呈现散在分布。在肿瘤组织中Tregs的数量为(2.3±2.1)/HP，在慢性胆囊炎标本中未见FoxP3阳性细胞3、无肿瘤转移的肝十二指肠韧带淋巴结组织中IDO、FoxP3的表达情况在13例未发生转移的肝十二指肠韧带内淋巴结中，IDO主要表达于形态似树突状细胞的胞浆中，其中IDO强表达者(++～+++)3例(23.1％)，缺失或弱表达者(—～+)10例(76.9％)：Tregs的数量为(2.8±1.7)/HP4、胆囊癌组织及淋巴结组织中IDO与Tregs之间的相关性在胆囊癌组织中，IDO的表达强度与Tregs之间呈现线性相关(r=0.619，P=0.041)；在无肿瘤转移的肝十二指肠韧带内淋巴结中，IDO的表达强度与Tregs之间亦呈线性相关(r=0.701，P=0.037) 5、IDO、Tregs与胆囊癌临床病理特征之间的关系分别分析患者胆囊癌组织中IDO表达强度、Tregs数量与患者性别、年龄、术前CA19-9水平、黄疸、胆囊结石、肿瘤大小、UICC分期、癌细胞分化程度等临床病理特征资料之间的关系。结果显示胆囊癌组织中IDO表达强度、Tregs数量与UICC分期、癌细胞分化程度间的差异具有统计学意义(P值均小于0.05) 6、IDO、Tregs与预后的关系在39例根治性胆囊癌切除术中，肿瘤组织中IDO强表达者较IDO低表达者5年累计生存率低，肿瘤组织中浸润Tregs数量多者较Tregs数量低者5年累计生存率低(P值均<0.05) Cox回归模型分析显示肿瘤组织中IDO表达强度、Tregs数量、UICC分期是影响胆囊癌根治术后5年累计生存率的独立危险因素(P值均<0.05) 结论： 1.胆囊癌组织及引流淋巴结中存在IDO的表达及Tregs的浸润； 2.胆囊癌组织中IDO的表达强度、局部浸润Tregs的数量与肿瘤的分级、分期相关，分级越低，分期越晚者，IDO表达强度越高，局部浸润Tregs数量越多； 3.胆囊癌组织中IDO的表达强度与Tregs的数量是影响胆囊癌根治术后5年累计生存率的独立危险因素，与预后负相关。

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论文说明：缩略词表

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第1章 引言

第2章临床资料与方法

2.1临床资料

2.2免疫组织化学染色方法

2.3免疫组织化学染色结果判定

2.4 随访

2.5统计方法

第3章 结果

3.1 胆囊癌组织、慢性胆囊炎组织中IDO的表达情况

3.2胆囊癌组织、慢性胆囊炎组织中FoxP3的表达情况

3.3胆囊癌肝十二指肠韧带淋巴结组织中IDO、FoxP3的表达情况

3.4胆囊癌组织及淋巴结组织中IDO与Tregs之间的相关性

3.5 IDO、Tregs与胆囊癌中临床病例特征之间的关系

3.6 IDO、Tregs与预后的关系

第4章讨论

4.1肿瘤免疫耐受在肿瘤发生、发展中的作用

4.2胆囊癌中IDO的表达

4.3胆囊癌组织中Tregs的浸润

4.4胆囊癌区域引流淋巴结中IDO的表达及Tregs的浸润

4.5胆囊癌中IDO与Tregs的关系

4.6展望

第5章结论

参考文献

附 图

致谢