肾活检组织Perforin、GranzymeB、IDO表达对早期移植肾功能异常鉴别作用的研究

摘要

引言： 肾移植目前已经成为终末期肾病患者主要的治疗手段之一，随着近年来移植免疫研究的不断深入和新型免疫抑制剂的不断问世，急性排异发生率显著下降，一年移植物的存活率得到了明显的提高，但是由于急性排异不仅可以引起移植物早期失功，而且对后期慢性移植物肾病和移植物长期存活有直接的影响，急性排异仍然是术后主要并发症之一。在新型免疫抑制方案下，急性排异临床表现发生了很大的变化，移植肾区疼痛、少尿、血尿、发热、血压升高等传统表现多不典型，移植物的常规病理活检已经成为急性排异诊断的主要方法，但常规病理活检存在着它自身的局限性，很难诊断术后移植肾功能异常但未达到Banff病理诊断标准的早期排异，病理与临床诊断的不一致(约5％—10％)，如：很难鉴别术后急性排异、急性肾小管损伤、Ptc等并发症对移植肾造成的损伤。肾移植术后近期急性排异仍然是令人担忧的并发症，它不仅导致免疫抑制剂上调和相关并发症，而且术后一年内排异虽然不会导致移植肾近期失功，但30％—40％会出现长期的移植肾功能异常，降低移植肾长期生存率。如何减少排异反应发生并能尽早发现排异反应，延长移植肾功能显得尤为重要。 对病理活检进行有益的补充，这已经成为移植界新兴的课题。正是基于上述原因，我们对穿孔素(Perforin)、颗粒酶B(GranzymeB)和吲哚胺2，3-双加氧酶(IDO)在肾移植受者活检组织中的表达进行了研究。 材料和方法： 1.病例选择 2001年6月～2007年7月，在本中心接受肾脏移植患者中，术后1月内血肌酐较基础值升高25％以上且移植肾活检证实为急性排异(AR)44例；病理活检证实为急性肾小管损伤(ATI)19例；病理活检证实为PTC内炎细胞浸润但未达到Banff排异诊断标准(Ptc)14例；术后1个月左右定期活检且移植肾功能稳定(Ts)41例。所有的移植肾活检病理诊断均由一位专门的移植病理医生根据Banff97和Banff2005作出诊断。以上受者均为首次移植，尸体供肾，留取活检标本时无明显肺部感染、尿路感染者，随访期间无恶性肿瘤者。同时获取118例相应病例移植时血管刚开放时(postperfusion)的活检组织，所有标本均采用福尔马林固定、石蜡包埋保存。 2.免疫组化的方法研究急性排异者(AR)、管周毛细血管炎细胞浸润者(Ptc)、移植肾功能稳定者(Ts)和急性肾小管损伤者(ATI)活检组织穿孔素(Perforin)、颗粒酶B(GranzymeB)、IDO的表达及血管刚开放时活检组织IDO的表达。 3.统计学方法： 所有数据采用SPSS13.0软件包，免疫组化的实验数据采用均数±标准差，不同组间比较采用Mann—Whitney U Test检验，多样本计量资料行方差分析及LSD检验(比较前行方差分析)，如方差不齐行Dunnett T3检验，计数资料采用卡方检验，确定检验水准为p=0.05，p<0.05时差异具有显著性。敏感性和特异性计算分别如下：敏感性=真阳性样本数(TP)／[TP+假阴性样本数]；特异性=真阴性样本数(TN)／[TN+假阳性样本数]。 结果： 1.移植术后急性排异组。IDO阳性率为86.4％，阳性积分为5.54±3.11，而这个比例跟急性肾小管损伤组(10.5％，0.79±2.42)和移植肾功能稳定组(12.2％，0.85±2.32)相比，具有显著性差异(P<0.0001)；管周毛细血管炎细胞浸润组(71.4％，4.78±3.45)跟急性排异组相比，没有统计学差异(P=0.233，P=0.972)；急性排异组中C4d(+)组(84.6％，5.15±3.12)和C4d(一)组(88.9％，6.11±3.10)相比，没有统计学差异(P=1.000，P=0.249)；急性排异组中IA型IDO阳性率和阳性积分别为(90.9％，6.00±2.97)，与IIA型(80.0％，5.50±3.50)和体液性排异(87.0％，5.35±3.12)相比，没有统计学差异(P=0.722)；急性排异组中管周毛细血管C4d(+)组PTC阳性细胞浸润率(92.3％)与C4d(一)组(55.6％)相比，具有显著性差异(P=0.008)。IDO在急性排异组、管周毛细血管炎细胞浸润组、急性肾小管损伤组及定期活检移植肾功能稳定组相应的血管刚开放时活检组织表达的阳性率与各组表达的阳性率的一致性都达到了100％。 2.移植术后急性排异组GranzymeB阳性表达率为100％，阳性细胞数为20.55±17.62，而这个比例跟急性肾小管损伤组(10.5％，0.42±1.30)和定期活检移植肾功能稳定组(0，0.00)相比，具有显著性差异(P<0.0001)；管周毛细血管炎细胞浸润组(100％，12.57±6.90)跟急性排异组相比，没有统计学差异(P=0.09)；急性排异组中C4d(+)组GranzymeB阳性率和阳性细胞数为(100％，23.38±18.80)和C4d(一)组(100％，16.44+15.36)相比，没有统计学差异(P=o．249)；急性排异组中IA型GranzymeB阳性率和阳性细胞数为(100％，15.55±16.96)，与IIA型(100％，24.50+16.46)和体液性排异(100％，21.21±18.59)相比，没有统计学差异(P=o．628)。 3.移植术后急性排异组Perforin阳性表达率为100％，阳性细胞数为12.48+11.39，而这个比例跟急性肾小管损伤组(10.51％，0.34±0.93)和定期活检移植肾功能稳定组(0，0.00)相比，具有显著性差异(P

目录

引言

资料和方法

结果

讨论

结论

下一步实验

参考文献

综述一:IDO在移植中的应用

综述二：CD44在移植肾排异反应中的应用

综述三：内皮素与肾移植的研究进展

致谢