SeNHXⅠ基因表达载体构建与风铃花遗传转化的研究

摘要

高浓度的NaCl可引起盐胁迫，进一步使植物的新陈代谢紊乱，包括K+/Na+比率的不平衡，渗透胁迫，离子毒害，对植物组织造成伤害。而Na+/H+逆向转运蛋白可以促使Na+和H+的跨膜逆向运输，降低植物细胞中钠离子浓度的积累，抵御盐分胁迫，提高植物的耐盐性。对于植物Na+/H+逆向转运蛋白基因进行分子操作，有利于更深入的了解该基因，促进植物耐盐基因工程的发展. 本研究课题以Na+/H+逆向转运蛋白家族中的SeNHX1为研究对象，使用了pBin121双元表达载体，pBin121含35S启动子片段，具有卡那霉素抗性和GFP绿色荧光蛋白标记基因，通过基因重组将SeNHX1与双元表达载体连接，获得pBin121-SeNHX1，所得到的表达质粒载体直接转入根癌农杆菌C58。 实验的另一个方面是风铃花（Campanula medium）植株再生体系的建立。由于前人在风铃花组织培养这一研究方面的空白，可以说我们对风铃花组培体系的摸索是创新的。通过尝试2，4-D，6-BA，NAA等激素的不同组合，筛选出了愈伤诱导培养基，芽分化培养基，生根培养基的激素配比，最终建立了一套完整的风铃花组织培养体系，为下一步农杆菌侵染进行转基因操作奠定了基础。 最后一个方面，运用农杆菌介导转化方法，使SeNHX1基因导入目标植物。对筛选出来的抗性植株进行初步的检测，包括荧光检测、PCR等方法与野生型植株进行对照。通过初步的检测表明，SeNHX1成功导入风铃花中。

目录

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第一章文献综述

1.1植物抗盐碱现状与前景

1.1.1盐胁迫对植物的伤害

1.1.2盐胁迫的作用机理

1.1.3植物抗盐的生理基础

1.1.4植物耐盐的分子机制

1.1.5植物抗盐的研究前景展望

1.2植物耐盐基因工程研究进展

1.2.1脯氨酸基因

1.2.2甜菜碱合成酶基因

1.2.3糖醇类合成基因

1.2.4Na+/H+逆向转运蛋白

1.3花卉植物组织培养与转基因花卉

1.3.1组织培养

1.3.2花卉基因工程

第二章SeNHX1植物表达载体的构建

2.1材料与方法

2.1.1材料

2.1.2方法

2.2结果与分析

2.2.1pBin121-SeNHX1表达载体的构建过程

2.2.2植物表达载体的PCR和酶切鉴定

2.3讨论

第三章风铃花组织体系的建立及卡那霉素筛选压力的确定

3.1风铃花愈伤组织诱导和组织再生

3.1.1材料与仪器

3.1.2试验方法

3.1.3结果与分析

3.1.4讨论

3.2风铃花卡那霉素与头孢霉素筛选浓度的确定

3.2.1试验方法

3.2.2实验结果

3.2.3讨论

第四章农杆菌介导的风铃花转化

4.1材料与方法

4.1.1植物材料

4.1.2质粒与菌株

4.1.3培养基

4.2实验设计

4.2.1影响农杆菌转化因素的实验设计

4.2.2风铃花遗传转化及其步骤

4.3结果与分析

4.3.1农杆菌侵染效果

4.3.2重悬液的农杆菌浓度对抗性愈伤组织诱导与不定芽分化的影响

4.3.3侵染时间对风铃花叶片抗性愈伤诱导与不定芽分化的影响

4.3.4共培养时间对抗性芽分化率的影响

4.3.5乙酰丁香酮浓度对风铃花叶片抗性愈伤组织的诱导与不定芽分化的影响

4.4讨论

第五章遗传转化体的检测分析

5.1材料与试剂

5.1.1材料试剂

5.1.2主要仪器

5.2方法

5.2.1荧光检测

5.2.2 PCR检测

5.3结论

5.4讨论

第六章结论

参考文献

致谢