白色念珠菌对口腔角质形成细胞移行能力及其相关信息通路影响的体外研究

摘要

研究背景近年研究发现，细胞移行(cell.migration)不仅在胚胎发育、免疫反应、创伤修复和组织再生等生理过程中发挥着重要作用，且参与慢性炎症、血管疾病和肿瘤转移等病理过程。白色念珠菌(candidaalbicans，C.albicans)是机体中最常见的条件致病菌，C.albicans对宿主细胞的粘附以及在此过程中C.albicans与宿主细胞的交互作用亦成为近年广受关注的研究课题。我们推论：C.albicans感染宿主细胞后可通过细胞内信息流改变宿主细胞的移行功能，但缺乏直接的研究证据证实。本课题以口腔黏膜角质形成细胞株为研究对象，用C.albicans刺激细胞后观察细胞移行功能的变化以及与移行密切相关的细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinase cascade，ERK)和灶性粘附激酶ffocal adhesion kinase，FAK)信息通路的变化，来探索C.albicans与口腔黏膜角质形成细胞交互作用过程中是否会改变细胞的移行能力，并对其相关信息通路进行研究。 研究目的在体外观察C.aIbicans感染口腔黏膜上皮细胞后是否诱导细胞移行发生改变，并初步探讨与细胞移行密切相关的ERK和FAK通路的变化情况。 研究方法以口腔角质形成细胞株Tca8113作为研究对象，①用westemblotting的方法检测C.albicans直接刺激细胞后10min、20min、30min、60min和120min的角质细胞裂解液，检测磷酸化ERK和FAK和总ERK和FAK的表达情况，以未受C.albicans刺激的细胞作为对照，观察C.albicans刺激口腔黏膜角质形成细胞后不同时间段内ERK和FAK信息通路的变化情况。②将Tca8113在Transwell上室培养，在其下室加入一定浓度的C.albicans，共培养48小时，计数穿过Transwell膜的细胞数来评价C.albicans及其代谢产物诱导的口腔黏膜角质形成细胞移行功能的改变，以未受C.albicans刺激的细胞和预先用特异性ERK抑制剂或FAK抑制剂干预的细胞作为对照，以了解C.albicans及其代谢产物对口腔黏膜角质形成细胞移行功能的影响，以及ERK和FAK信息通路在此过程中的作用。 研究结果①C.albicans感染口腔黏膜角质形成细胞早期即可激活ERK信息通路，在10rain时ERK信息通路被激活且达到最高峰，从20min开始活化ERK表达降低，至120min时消失。②C.albicans感染口腔黏膜角质形成细胞早期也可激活FAK信息通路，活化FAK在10min时出现，20min达到最高峰，30min时开始降低，至120时则完全消失。③C.albicans与口腔黏膜角质形成细胞在Transwell小室中共培养48小时后，可显著增强细胞移行能力。④ERK抑制剂和FAK抑制剂均能有效抑制C.albicans及其代谢产物诱导的口腔黏膜角质形成细胞移行功能增强作用。 结论①ERK和FAK信息通路的活化可能是口腔黏膜角质形成细胞抵抗C.albicans感染的早期应答反应。②C.albicans可通过增强口腔黏膜角质形成细胞的移行能力从而改变细胞的生物学行为。③ERK和FAK信息通路系统参与了C.albicans诱导的口腔黏膜角质形成细胞移行能力改变过程，且ERK和FAK特异性抑制剂可在一定程度上逆转C.albicans的作用，这不仅从另一角度证实了C.albicans对角质细胞移行能力的改变及相关信息通路的作用，同时提示，阻断ERK或FAK信息通路的激活可能为阻抑C.albicans与口腔角质形成细胞相互作用药物的研发靶点。

目录

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缩略词表

前 言

第一部分白色念珠菌激活口腔黏膜角质形成细胞细胞外信号调节蛋白激酶信息通路的研究

第二部分白色念珠菌对口腔黏膜角质形成细胞移行能力的影响

第三部分ERK信息通路下游分子FAK在白色念珠菌与口腔黏膜角质形成细胞交互过程中的作用

全文总结

参考文献

附 录

综 述

个人简历

致谢