麻疯树（Jatropha curcas）核糖体失活蛋白（curcin）的分离纯化、活性检测及抗肿瘤活性初探

摘要

麻疯树为大戟科麻疯树属植物，在我国的西南地区有着丰富的资源。以四川攀西地区采集的麻疯树为材料，采用改进的硫酸铵分级沉淀和阳离子交换层析法从麻疯树种仁中分离纯化出麻疯树核糖体失活蛋白Curcin。Curcin的纯度更高，得率也达到1‰左右建立了一种非放射性的利用兔网织红细胞裂解液无细胞翻译系统和荧光素酶检测系统的核糖体失活蛋白检测方法，快速检测了两种方法提取的麻疯树核糖体失活蛋白Curcin的无细胞蛋白质翻译抑制活性，测得离子交换层析法纯化Curcin samplel Ic<,50>=0.045±0.009nM，分子筛层析纯化Curcin sample2 IC<,50>=0.217±0.026nM；该方法避免了放射性同位素的使用，使检测过程简便、快速、安全、准确。同时还对试验条件，包括反应时间、温度，缓冲液PH值、盐浓度等进行了摸索和优化。 体外生物学活性试验表明，curcin对HepG2肝癌细胞、SP2/O小鼠骨髓瘤细胞、小细胞肺癌细胞NCI-H446、小鼠肉瘤腹水型细胞S-180、胃癌细胞SGC7901都没有表现出明显的抑制作用，但是却能够诱导S-180细胞凋亡，荧光显微镜观察下，可以见到明显的凋亡细胞，流式细胞仪测定细胞周期，有明显的亚二倍体凋亡峰。 利用与巯基反应特异性很高的PEG-maleimide将PEG定点偶联到的Cys残基巯基侧链上进行了定点PEG修饰,得到均一的修饰产物。

目录

论文说明：图片目录及表格目录

摘要

第一章麻疯树核糖体失活蛋白的分离纯化

第二章麻疯树核糖体失活蛋白(curcin)的蛋白质抑制翻译活性的非放射性检测

第三章麻疯树核糖体失活蛋白(curcin)的抗肿瘤活性

第四章麻疯树核糖体失活蛋白(curcin)的PEG修饰

文献综述植物核糖体失活蛋白的研究进展

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致谢

硕士期间发表论文