三氧化二砷药物洗脱支架预防血管PTA术后再狭窄的实验研究

摘要

第一部分 三氧化二砷诱导犬动脉平滑肌细胞凋亡的体外实验研究 目的明确三氧化二砷诱导犬平滑肌细胞凋亡的作用，进一步探讨三氧化二砷体外诱导犬动脉平滑肌细胞凋亡的最佳有效浓度。 材料和方法 1．体外原代培养犬动脉平滑肌细胞。 2．眦染色光学显微镜观察及α一平滑肌肌动蛋白免疫组化染色鉴定平滑肌细胞。 3．MTT法观察不同浓度三氧化二砷对平滑肌细胞增殖的抑制作用。 4．绘制不同浓度三氧化二砷对平滑肌细胞增殖的生长抑制曲线。 5．透射电镜观察三氧化二砷诱导平滑肌细胞凋亡超微结构的变化。 结果体外实验表明 1．在三氧化二砷作用下平滑肌细胞生长受到抑制，抑制作用随浓度的提高和时间的延长而更加明显。 2．平滑肌细胞随三氧化二砷浓度增加，细胞凋亡明显，细胞增殖速度明显降低，存活细胞数减少。 3．透射电镜发现：凋亡平滑肌细胞的形态学变化，平滑肌细胞呈椭圆或不规则型，带有长的胞质突起，细胞表面有少量短小的微绒毛，细胞核偏于细胞的一端，核仁明显，胞质内有大的空泡状结构，为线粒体空泡变和脂滴空泡，细胞核染色质溶解，密斑密体形成高电子密度的颗粒，肌丝溶解，线粒体肿大空泡变性，细胞基质电子密度低下，少量细胞质膜脱落，形成凋亡小体。 结论 1．三氧化二砷对犬髂动脉平滑肌细胞增殖有明显抑制作用：作用机制为诱导平滑肌细胞发生凋亡，从而遏止再狭窄的发生。 2．三氧化二砷使犬动脉平滑肌细胞的DNA合成和分裂的细胞逐渐减少，静止期和凋亡期的细胞逐渐增多，使细胞增殖阻滞于DNA合成期和DNA合成后期，减少平滑肌的增殖。 3．三氧化二砷诱导平滑肌细胞凋亡最低有效浓度为2．Oumol／L，4．Oumol／L三氧化二砷对血管平滑肌细胞有明显促凋亡作用，5．Oumol／L三氧化二砷有明显促血管平滑肌细胞死亡作用，上述作用有浓度及时间依赖性。 综上所述，三氧化二砷对再狭窄形成的主要原因平滑肌细胞过度增殖、有明确的抑制作用，使细胞的增殖与凋亡重新达到平衡，为三氧化二砷洗脱支架的动物实验提供重要实验室依据。 第二部分 三氧化二砷药物洗脱支架的制作 目的制作丙交酯一吗啉二酮聚合物涂层材料，利用涂层制作三氧化二砷药物洗脱支架，测量支架涂层质量及药物载药量。 材料与方法 1．自行合成丙交酯一吗啉二酮聚合物涂层材料。 2．制作三氧化二砷、雷帕霉素及无药洗脱支架。 3．测量三氧化二砷、雷帕霉素洗脱支架的涂层和药物载药量，测量无药洗脱支架的涂层质量。 结果 1．合成获得丙交酯一吗啉二酮聚合物涂层材料。 2．制作三氧化二砷洗脱支架12个，涂层平均质量186ug，平均载药量46．58ug：雷帕霉素支架6个，涂层质量178．5ug，载药量402．7ug：无药洗脱支架6个，涂层质量187．7ug。 结论 1．成功合成丙交酯一吗啉二酮聚合物涂层材料。 2．制成三氧化二砷药物洗脱支架及无药洗脱支架。 第三部分 三氧化．--．砷药物洗脱支架预防PTA术后再狭窄的动物实验研究目的通过动物实验，评价三氧化二砷药物洗脱支架预防PTA术后再狭窄的效果。以验证课题设想：1．三氧化二砷洗脱支架能否预防PTA术后再狭窄的发生；2．三氧化二砷洗脱支架与雷帕霉素洗脱支架预防PTA术后再狭窄疗效有无不同。材料与方法将12条犬的24条髂动脉血管行球囊扩张术后，植入支架。支架分组情况如下：镍钛合金编织无药洗脱支架6枚，雷帕霉素洗脱支架6枚，三氧化二砷洗脱支架12枚。分别于术后4，12周各组抽取一定数支架血管，DSA造影观察通畅情况及内支架再狭窄情况，随后处死实验犬，取出支架所在段血管，切片HE染色显微镜观察。评价：血管造影支架血管段是否狭窄及程度，支架血管壁的慢性排斥反应，支架的内膜覆盖情况，定量分析新生内膜增生程度。结果支架血管造影表现：4周，三氧化二砷洗脱支架组，无药洗脱支架组，雷帕霉素支架组三组支架均未发生再狭窄，血管通畅。12周，无药洗脱支架组可见明显再狭窄，雷帕霉素及三氧化二砷洗脱支架组可见轻微狭窄，与无药洗脱支架组有显著性差异(P<0．05)；病理切片示，12周时，三氧化-fi申及雷帕霉素洗脱支架组可见轻度血管新生内膜增生，无药洗脱支架组新生血管内膜明显增生。增生血管内膜厚度及面积，三氧化二砷与雷帕霉素组之间无显著性差异，三氧化二砷及雷帕霉素组与无药洗脱支架组之间，增生血管内膜厚度及面积有显著性差异。 结论 1．球囊扩张犬髂动脉后植入三氧化二砷支架的实验方法是安全可行的。 2．三氧化二砷支架，雷帕霉素支架，无药洗脱支架植入后4周时血管造影均未见明显狭窄。 3．三氧化二砷及雷帕霉素洗脱支架可有效降低新生内膜增生，12周时预防再狭窄的效果明显优于无药洗脱支架。 4．三氧化二砷及雷帕霉素洗脱支架12周时对支架所在段血管的再内皮化无明显影响。

目录

前言

第一部分三氧化二砷诱导犬动脉平滑肌细胞凋亡的体外试验研究

第二部分三氧化二砷药物洗脱支架的制作

第三部分三氧化二砷洗脱支架防止再狭窄的动物实验研究

参考文献

三氧化二砷与PTA术后再狭窄

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