苯并吖啶酮类双敏感探针制备及其在反相高效液相色谱-质谱中应用

摘要

反相高效液相色谱(RP-HPLC)因其强大的分离分析能力而成为许多研究领域广泛采用的一种有效分离手段,如生物学、化学、毒物学、临床医学、食品卫生及环境科学等。该方法也是分析化学中发展最快,应用最广的方法之一,然而由于样品中待测组分含量低或其本身性质以及高效液相色谱检测器的限制,并非所有化合物都可直接用于色谱分析。因此,开发具有高灵敏度的检测方法具有重要意义。近年来,研究者利用荧光标记试剂与本身不发荧光的化合物(如脂肪胺、脂肪醇等)发生衍生化反应,转变为发射荧光的衍生物,从而可以进行荧光检测,大大提高了检测灵敏度。本论文主要设计合成了三种质谱和荧光双敏感的苯并吖啶酮类探针分子,并研究了各探针分子的光谱性质。通过优化衍生、色谱和质谱条件,建立了高效、灵敏的反相高效液相色谱方法,并应用于有意义的实际样品分析。具体工作如下:
　　 第一章:简述了高效液相色谱和高效液相色谱-质谱联用的研究进展和基本理论；介绍了荧光原理和化学衍生化；总结了广泛使用的荧光衍生试剂。
　　 第二章:三种荧光探针:2-(苯并吖啶酮).乙基咪唑酸酯(BAEIC)、5-羰基咪唑苯并吖啶酮(IEBA)和苯并[b]吖啶酮-5-乙基对甲苯磺酸酯(BAETS)的设计合成及结构表征。
　　 第三章:利用双敏感探针2-(苯并吖啶酮)-乙基咪唑酸酯(BAEIC)作为柱前衍生标记试剂,用于脂肪胺的高效液相色谱分析,通过对衍生化条件的优化,建立了脂肪胺的柱前衍生高效液相色谱荧光检测法,并将该方法用于实际样品的测定。结果表明,建立的方法具有线性范围宽、重现性好、操作简单等特性,适用于实际样品的分析测定。
　　 第四章:利用5-羰基咪唑苯并吖啶酮(IEBA)作为荧光标记试剂,用于脂肪胺、芳香胺短链脂肪醇和长链脂肪醇的高效液相色谱-质谱检测,通过对衍生化反应条件和色谱条件的优化,建立了脂肪胺、芳香胺和脂肪醇类化合物的柱前衍生高效液相色谱荧光检测法,并将该方法应用于相关实际样品的测定,结果表明所建立的方法具有很大的可行性。
　　 第五章:利用苯并[b]吖啶酮-5-乙基对甲苯磺酸酯(BAETS)作为荧光标记试剂,用于胆汁酸的高效液相色谱-质谱检测。通过对衍生化反应条件和色谱条件的优化,建立了胆汁酸类化合物的柱前衍生高效液相色谱荧光检测法,并将该方法应用于相关实际样品的测定,结果表明所建立的方法具有很大的可行性。

目录

文摘

英文文摘

第一章 高效液相色谱及化学衍生化的应用进展

1 前言

2 高效液相色谱及质谱的研究现状

2.1 高效液相色谱的总述

2.2 高效液相色谱的创立

2.2 高效液相色谱的发展进程

2.3 高效液相色谱与经典液相色谱

2.4 高效液相色谱的分类及分离机制

2.5 高效液相色谱的特点

2.6 高效液相色谱的检测器

2.7 高效液相色谱法在分析化学专业的应用

2.8 高效液相色谱-质谱联用技术的发展和应用

2.9 Agilent 1100型高效液相色谱-质谱联用仪的简介

3 化学衍生化技术

3.1 化学衍生化的目的及要求

3.2 化学衍生化法的分类

4 荧光衍生化的研究进展

4.1 荧光分析的发展

4.2 荧光产生的原理

4.3 环境因素对荧光光谱和荧光强度的影响

4.4 荧光标记试剂的选择

5 常用荧光衍生试剂

6 化学衍生化中常见缩合剂及其应用特点

7 选题思想和主要研究内容

第二章 荧光标记试剂的设计合成与结构性质的表征

1 引言

2 双敏感探针2-(苯并吖啶酮)-乙基咪唑酸酯的合成及表征

2.1 探针分子的合成路线图

2.2 仪器与试剂

2.3 2-(苯并吖啶酮)-乙基咪唑酸酯的合成

3 5-羰基咪唑苯并吖啶酮的合成及表征

3.1 探针分子的合成路线图

3.2 仪器与试剂

3.3 5-羰基咪唑苯并吖啶酮的合成

4 苯并[b]吖啶酮-5-乙基对甲苯磺酸酯的合成及表征

4.1 探针分子的合成路线图

4.2 仪器与试剂

4.3 苯并[b]吖啶酮.5.乙基对甲苯磺酸酯的合成

第三章 双敏感探针2-(苯并吖啶酮)-乙基咪唑酸酯用于脂肪胺分析及其荧光和质谱的增敏研究

1 引言

2 实验部分

2.1 仪器与试剂

2.2 标准溶液的配制

2.3 色谱质谱条件

2.4 衍生化步骤

2.5 样品处理

2.6 百分离子化估计

3 结果与讨论

3.1 紫外光谱性质

3.2 荧光光谱性质

3.3 色谱质谱方法的建立

3.4 实际样品分析

4 结论

第四章 荧光标记探针5-羰基咪唑苯并吖啶酮的荧光性质研究及其高效液相色谱-质谱分析

第一节 5-羰基咪唑苯并吖啶酮的荧光性质研究

1 5-羰基咪唑苯并吖啶酮的荧光光谱

2 温度对5-羰基咪唑苯并吖啶酮荧光性质的影响

3 质子给予体浓度对5.羰基咪唑苯并吖啶酮荧光性质的影响

第二节 基于LC-APCI-MS荧光探针5-羰基咪唑苯并吖啶酮测定脂肪胺

1 引言

2 实验部分

3 结果与讨论

4 结论

第三节 5-羰基咪唑苯并吖啶酮对芳香胺类化合物的荧光标记及质谱鉴定

1 引言

2 实验部分

3 结果与讨论

4 结论

第四节 5-羰基咪唑苯并吖啶酮柱前衍生短链脂肪醇的高效液相色谱分析

1 引言

2 实验部分

3 结果与讨论

4 结论

第五节 5-羰基咪唑苯并吖啶酮用于长链脂肪醇的高效液相色谱分析

1 引言

2 实验部分

3 结果与讨论

4 结论

第五章 胆汁酸的双敏感探针苯并[b]吖啶酮-5-乙基对甲苯磺酸酯:荧光检测和APCI-MS鉴定

1 引言

2 实验部分

2.1 仪器与试剂

2.2 标准溶液的配制

2.3 色谱及质谱条件

2.4 标准品衍生化

2.5 样品处理

3 结果与讨论

3.1 光谱性质

3.2 pH对荧光和离子化效率的影响

3.3 衍生化条件

3.4 色谱分离

3.5 质谱鉴定

3.6 线性回归方程、检出限和重现性

3.7 实际样品的分析

4 结论

参考文献

攻读硕士期间发表的论文

致谢