龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌rgpB基因多态性研究

摘要

目的:通过检测慢性牙周炎患者病变部位与非病变部位以及牙周健康者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis，P.gingivalis)的毒力因子——精氨酸-牙龈素B(arginine-gingipainB，RgpB)的基因多态性，探讨不同P.gingivalis基因型在慢性牙周炎发生发展中所起的作用，为牙周病致病机制的研究提供有益的参考。 材料与方法:1.研究对象的选择：实验组选择慢性牙周炎者42例，对照组选择牙周健康，年龄，性别与实验组具可比性者20例。所有受试者均无全身系统性疾病，未接受牙周系统治疗，近3个月未服用抗生素，无吸烟史，知情同意。 2.记录牙周指数：所有检查内容均由同一检查者完成。选择牙周炎患者口腔中病变较重的部位与健康或仅存在轻度龈炎的部位和牙周健康者的健康部位，记录探诊出血指数(BleedingonProbing，BOP)，牙周探诊深度(ProbingDepth，PD)，临床附着丧失(ClinicalAttachmentLoss，CAL)及牙齿松动度(ToothMovement，TM)。 3.样本采集及细菌培养：用无菌牙签取被检牙位龈下菌斑，一份置于1ml的PBS缓冲液中，-70℃保存待检，另一份置于转送液(TD液)中10倍系列稀释后立即接种于BHI培养基上培养，经分离、传代、增菌、生化鉴定后收集菌体。 4.P.gingivalis的检测：酚-氯仿法提取DNA，用P.gingivalis16SrRNA特异引物PCR扩增，1.5％琼脂糖凝胶电泳检测。 5.rgpB基因多态性的检测：设计引物对编码rgpB催化域的基因(rgpBcatalyticdomain，rgpB-cd)进行扩增，经MboⅡ、BsrGⅠ双酶切后，2％琼脂糖凝胶电泳检测。 6.统计学分析：采用SPSS11.5统计软件，采用χ2检验进行统计学分析。显著水平：P＜0.05时有显著性差异，P＜0.01时有高度显著性差异。 结果:1.用培养法检测病变部位、非病变部位及健康部位P.gingivalis的检出率分别为26.19％、16.67％和0％。病变部位与非病变部位之间P.gingivalis的检出率的差异无统计学意义，但与健康部位的差异具有统计学意义。 2.PCR法检测病变部位、非病变部位及健康部位P.gingivalis的检出率分别为85.70％、76.19％和40.00％。病变部位与非病变部位之间P.gingivalis的检出率的差异无统计学意义，但两者与健康部位的差异均具有统计学意义。 3.培养法与PCR法检测P.gingivalis的阳性检出率结果比较，PCR法阳性率高于培养法，具有高度显著性差异。 4.病变部位、非病变部位及健康部位P.gingivalis的rgpB-cd基因的阳性检出率分别为100.00％、90.63％和62.50％。病变部位与非病变部位之间P.gingivalis的rgpB-cd基因的检出率的差异无统计学意义，但与健康部位的差异具有统计学意义。 5.从同一龈下菌斑样本中收集的不同P.gingivalis菌株rgpB-cd基因型检测结果一致。 6.病变部位rgpB-cdⅠ～Ⅳ型P.gingivalis的检出率分别为11.11％、36.11％、0％和52.78％，其中Ⅳ型的检出率最高，其次为Ⅱ型，两者间无统计学差异(P＞0.05)，但均高于Ⅰ型和Ⅲ型且具有统计学差异(P＜0.05或P＜0.01)。 7.非病变部位rgpB-cdⅠ～Ⅳ型P.gingivalis的检出率分别为17.24％、75.86％、3.45％和3.45％，其中Ⅱ型的检出率最高且与Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型相比具有高度显著性差异(P＜0.01)，而Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型之间的检出率比较无统计学差异(P＞0.05)。 8.健康部位仅检出rgpB-cdⅠ型和Ⅱ型P.gingivalis，检出率分别为20.00％和80.00％。 9.rgpB-cdⅣ型在病变部位检出率高于非病变部位，rgpB-cdⅡ型在病变部位检出率低于非病变部位，且均具有高度显著性差异(P＜0.01)，Ⅰ型和Ⅲ型在三种牙周状态下的检出率无统计学差异(P＞0.05)。 结论:1.慢性牙周炎患者P.gingivalis的检出率高于牙周健康者，提示P.gingivalis与慢性牙周炎有一定的相关性，且在牙周健康人群中同样可检出。 2.慢性牙周炎患者P.gingivalis的rgpB-cd基因的检出率高于牙周健康者，推测rgpB-cd基因可能与P.gingivalis的致病性有关。 3.在同一位点上P.gingivalis的rgpB-cd基因型存在一致性。 4.P.gingivalis的rgpB-cd基因存在多态性，病变部位rgpB-cdⅣ型P.gingivalis检出率最高且高于非病变部位和牙周健康部位，推测rgpB-cdⅣ型P.gingivalis可能与慢性牙周炎的关系最密切，在致病过程中起主要作用；非病变部位和牙周健康部位rgpB-cdⅡ型P.gingivalis的检出率最高且高于病变部位，推测Ⅱ型可能与慢性牙周炎无关，为正常人群或牙周健康部位中的定居菌。

目录

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中文论著摘要

英文论著摘要

英文缩略语

前 言

第一部分 龈下菌斑中P.gingivalis的检测和分析

第二部分 龈下菌斑中P.gingivalis rgpB-cd基因的研究

第三部分 P.gingivalis的rgpB-cd基因多态性分析及其与牙周状态的关系

讨 论

结 论

本研究创新性的自我评价

参考文献

附

综述 牙龈卟啉单胞菌基因多态性及其致病作用

在学期间科研成绩

致 谢

个人简介