缺氧复氧对血管内皮细胞t-PA、PAI-1、NO及NOS表达的影响及辛伐他汀的干预研究

摘要

本文研究目的：探讨缺氧复氧对血管内皮细胞t一PA、PAI一1、№和№S表达的影响及辛伐他汀的干预作用，并探讨其可能的机制。 研究方法：体外培养人脐静脉内皮细胞株ECV304，使用自制的缺氧小室对ECV304进行缺氧复氧处理，将细胞培养于24孔培养板和25m1培养瓶。L将ECV304细胞进行缺氧复氧处理，分别于缺氧2小时、复氧2、4、8、16小时收集所需标本，观察缺氧复氧对t一PA、PAI一1、N0、№S活力及e№SmRNA、州0SmRNA、e№S蛋白、表达的影响；2．不同浓度的辛伐他汀(0．1、L0、5．0、10．0μm01几)以及10．Oumol／L的辛伐他汀+0．2mm0l／L的甲羟戊酸处理ECV304细胞24小时后再行缺氧2小时复氧2小时处理，收集所需标本，观察辛伐他汀对七一PA、队卜1、N0和№S活力及eNOSmRNA、州0SmRNA、e№S蛋白表达的影响；3．用10．0umol几的辛伐他汀预处理ECV30424小时后再行缺氧2小时、复氧2、4、8、16小时处理，收集各时间段细胞培养液，观察辛伐他汀预处理对ECV304分泌№和№S活力的影响。4．不同浓度的辛伐他汀(0．1、1．O、10．0μmol几)以及10．Oμmol／L的辛伐他汀+0．2mm01／L的甲羟戊酸处理ECV304细胞24小时，收集各组细胞标本，提取总R№和胞浆蛋白，观察辛伐他汀对e№SmRNA、州0SmR№、e№S蛋白表达的影响。测定培养液中t呻A、PAI一1浓度用乩ISA法；检测培养液中NO的含量及№S活力分别用硝酸还原酶法和化学比色法。收集25ml培养瓶细胞，进行RT一PCR检测州0S、eNOS基因相对表达量，采用异硫青酸一苯酚一氯仿一步法提取细胞总RNA，纯度检验合格后，取总RNA做逆转录生成cDDNA，进行半定量PCR，产物经图象分析系统扫描评价各组州iNOS和e№S基因相对表达量；Western-b1ots检测e№S蛋白相对表达量，以上各组细胞提取总蛋白，进行SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳，再进行电转膜，用一抗和二抗进行免疫印迹反应，显色，图象扫描分析，检测e№S蛋白相对表达量。 研究结果： 1．复氧2小时、4小时培养液中t队浓度明显增加(P均0．05)，tPA/PAI-1比值明显增加(P均O．05)。 3．缺氧2小时、复氧2小时ECV304eNOSmRNA相对表达量明显减少(P均

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前言

第一章缺氧复氧对血管内皮细胞分泌tPA、PAI-1的影响及辛伐他汀的干预作用

第二章缺氧复氧损伤对血管内皮细胞分泌NO及NOS活力的影响及辛伐他汀的干预作用

第三章缺氧复氧损伤对血管内皮细胞NOS基因表达的影响及辛伐他汀的干预作用

结论

综述：他汀类药物对血管内皮细胞的影响

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